抑制PI3K-Akt通路提高K562細胞對柔紅霉素的化療敏感性的研究.pdf

1、目的：
　　檢測PI3K/Akt抑制劑LY294002及蒽環(huán)類化療藥物柔紅霉素(DNR)對慢性髓系白血病細胞株K562的增殖抑制作用及促凋亡作用,并探討其作用機制。
　　方法：
　　(1)體外培養(yǎng)K562細胞,MTT比色法檢測LY294002和DNR在不用濃度、不同作用時間點對K562細胞增殖的影響,流式細胞儀檢測LY294002作用前后細胞周期變化。
　　(2)選取LY294002及DNR的濃度分別為10μmo

2、l/L及0.5μg/mL做進一步研究,實驗分4組:對照組(Control)、LY294002組、DNR組、聯(lián)合用藥組(L+D),觀察各實驗組作用不同時間后 K562細胞形態(tài)變化,AO/EB雙熒光法觀察細胞凋亡情況,流式細胞術(shù)檢測各組細胞周期變化。
　　(3)RT-PCR方法檢測各實驗組作用36h后K562細胞Skp2、P27、Bcl-2和Bax mRNA的表達。
　　(4)Western blot方法檢測各實驗組作用36h后

3、K562細胞Skp2、P27、Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：
　　(1)LY294002和DNR均能夠抑制K562細胞的生長并促進細胞凋亡,該抑制作用具有濃度及時間依賴性(P<0.05),聯(lián)合用藥組細胞增殖抑制率及細胞凋亡率均高于DNR單藥組(P<0.05)。
　　(2)LY294002作用K562細胞36h,隨著濃度的增加G0/G1期阻滯增強,S期細胞減少(P<0.05),DNR組與對照組相比 G0/

4、G1期細胞明顯減少,S期細胞增加(P<0.05);聯(lián)合用藥組G2/M期細胞顯著減少,較對照組及DNR單藥組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與DNR單藥組比較G0/G1期細胞增加(P<0.05),S期細胞減少但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(3)各藥物處理組與對照組相比以及聯(lián)合用藥組與DNR單藥組相比,Skp2及Bcl-2的mRNA表達量減少,P27 mRNA表達增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,Bax的表達在各實驗組中的差異無統(tǒng)計學(xué)意義

5、,但計算Bcl-2/Bax比值,各藥物處理組與對照組比較以及聯(lián)合用藥組與DNR單藥組比較,數(shù)值均明顯降低(P<0.05)。
　　(4)Western blot結(jié)果顯示,各藥物處理組與對照組比較以及聯(lián)合用藥組和DNR單藥組比較,Skp2的蛋白表達量顯著降低,P27的蛋白表達量增加,Bcl-2蛋白表達量明顯降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,Bax的蛋白表達量各組之間差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義,Bcl-2/Bax比值各藥物處理組與對照組比較以及聯(lián)合用