柯里拉京對單純皰疹病毒性腦炎發(fā)病過程中TLR2通路干預作用機制研究.pdf

1、目的：（1）在HSV-1感染BV2細胞建立的單純皰疹病毒性腦炎模型中，觀察TLR2信號通路各分子及下游炎性因子的變化，進一步明確TLR2通路在其發(fā)病過程中的作用；(2)研究在正常BV2細胞、單純皰疹病毒性腦炎模型中，柯里拉京對TLR2信號通路、下游炎性因子的干預作用，探索柯里拉京發(fā)揮抗炎作用的機制。
　　方法：（1）培養(yǎng)BV2細胞系、Vero細胞系，用Vero細胞擴增HSV-1，提取HSV-1，10稀釋病毒共8個滴度梯度，對BV2

2、細胞進行滴定，記錄細胞形態(tài)變化，采用Reed-Muench法計算出病毒TCID50滴度，以100TCID滴度HSV-1感染BV2細胞系建立單純皰疹病毒性腦炎模型，模型組、正常對照組分別用ElISA方法檢測炎癥因子TNF-α、IL-6的表達量，用 RT-PCR方法檢測 TLR2及下游信號通路中TIRAP、MyD88、IRF-5、P38、NEMO mRNA相對表達水平，用流式細胞術檢測細胞表面TLR2的表達水平，用Western-blot方

3、法檢測TIRAP、MyD88、P38、PP38、NEMO蛋白相對表達水平。（2）配制柯里拉京溶液，2倍稀釋8個濃度梯度對BV2細胞進行干預，用MTT方法檢測細胞活性以觀察柯里拉京的細胞毒性。用柯里拉京分別干預正常BV2細胞、HSE模型細胞，用上述方法檢測TLR2及下游各分子的變化。
　　結果：（1）HSV-1感染小膠質細胞BV2造模成功，單純皰疹病毒性腦炎模型組相對于對照組TLR2信號通路下游炎性因子TNF-α、IL-6分泌明顯增

4、多，TLR2及下游信號通路中TRIAP、MyD88、IRF5、P38、NEMO的mRNA表達量升高，細胞表面 TLR2增多，TRIAP、MyD88、P38、PP38、NEMO蛋白表達水平增高；差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（2）柯里拉京干預正常BV2細胞后，信號通路各分子TLR2、TIRAP、MyD88、IRF-5、P38、NEMO的mRNA表達量下降（P<0.05），炎性因子IL-6分、TNF-α分泌量及細胞表面TLR2受體表達