腹膜淋巴孔途徑及其對腹腔游離內毒素轉運的超微形態(tài)學研究.pdf

1、目的:腹膜淋巴孔是由腹膜間皮細胞伸出的胞質突起與相鄰細胞的胞質突起相互連接而成，為毛細淋巴管在腹膜間皮面上的開口。作為人體的一種恒定結構，腹膜淋巴孔的形態(tài)結構被許多研究人員關注，眾多的實驗已被證實腹膜淋巴孔與腹水轉歸、腹腔內腫瘤轉移等密切相關，但腹膜淋巴孔與腹腔內感染性物質內毒素的轉運的關系資料甚少。本實驗采用電鏡技術，對腹膜淋巴孔途徑進行超微形態(tài)學觀察，通過腹腔內注射示蹤標記的外源性內毒素，連續(xù)動態(tài)觀察其在腹膜淋巴孔途徑中的轉運及特點

2、，并與門靜脈途徑作差異性比較，為進一步開展腹膜淋巴孔的功能研究提供證據。
　　方法:1.結合文獻資料，獲取大鼠腹膜組織，透射電鏡(ScanningElectron Microscope，SEM)觀察腹膜淋巴孔的超微結構，掃描電鏡(Transmission Electron Microscope，TEM)觀察腹膜淋巴孔分布、大小及形態(tài)。使用Elescope計算機圖像處理軟件分析掃描電鏡下腹膜淋巴孔圖像，應用SPSS19.0軟件對圖像

3、數據進行統(tǒng)計分析，得到大鼠腹膜淋巴孔的平均直徑(μ m)及分布密度(/0.01mm2)等指標。2.在大鼠腹腔內注射FITC標記的內毒素，分別于注射后的5min、30min、1h、2h、3h取大鼠腹膜、乳糜池、門靜脈組織及門靜脈血、乳糜池液，各組織行冰凍切片，熒光顯微鏡觀察FITC標記的內毒素在腹膜、乳糜池、門靜脈的轉運情況，使用IMAGE-PRO PLUS6.0圖像處理軟件分析腹膜上、乳糜池壁、門靜脈壁的FITC的熒光強度，使用熒光分光

4、光度計分析門靜脈血及乳糜池液的FITC的熒光強度，應用SPSS19.0軟件對得到數據進行統(tǒng)計分析，并做差異性比較。3.在大鼠腹腔內注射納米金標記的內毒素，分別于注射后的5min、30min、1h、2h、3h取大鼠的腹膜、乳糜池、門靜脈組織，應用掃描電鏡及透射電鏡同時觀察納米金標記的內毒素在腹膜淋巴孔途徑動態(tài)轉運情況，使用Elescope計算機圖像處理軟件分析掃描電鏡下腹膜淋巴孔、乳糜池、門靜脈上的納米金標記的內毒素的分布密度（/0.01

5、mm2），使用SPSS19.0軟件對得到的分布密度進行統(tǒng)計分析，并對納米金標記的內毒素在腹膜淋巴孔途徑及門脈途徑的轉運做差異性比較。
　　結果:1.在掃描電鏡下，可以觀察到腹膜淋巴孔是位于腹膜立方間皮細胞之間的空洞，是由立方間皮細胞伸出的指狀突起與相鄰的細胞之間的指狀胞質突起相連而成的，呈圓形、橢圓形，平均直徑約為8.23±2.34μm，分布密度為1.2±0.7(/0.01mm2)，其底部有間皮下結締組織纖維。在透射電鏡下，腹膜淋

6、巴孔是由腹膜立方間皮細胞及其胞質突起圍繞而成的，立方間皮細胞胞體清晰，細胞核較大，核仁明顯，立方間皮細胞邊緣發(fā)出胞質突起，腹膜淋巴孔是毛細淋巴管在腹膜上的出口，并且向下通過腹膜下小管和淋巴引流單位(LDU)、淋巴陷窩與毛細淋巴管相連。2.熒光顯微鏡下，注射后的5min時，腹膜上即可出現FITC標記的內毒素，30min時腹膜上內毒素的吸附量逐漸上升并達到峰值，1h時開始出現下降趨勢（與30min相比，P＞0.05），2h后明顯下降（與30

7、min相比，P＜0.05）。每個時相點，乳糜池的變化如下:注射后的5min，乳糜池中出現了少量FITC標記的內毒素，30min逐漸上升，1h到達峰值，2h出現下降趨勢（與1h相比，P＞0.05），3h下降明顯（與1h相比，P＜0.05）。門靜脈的情況則是:注射后的5min，門靜脈中很難觀察到FITC標記的內毒素，隨著時間的推進，2h時門靜脈中內毒素到達峰值，3h出現下降（與2h比較，P＜0.05）。在實驗的5min、30min、1h、2

8、h、3h各個時相點，門靜脈的內毒素的表達均低于乳糜池(P＜0.05)。熒光分光光度計分析門靜脈血及乳糜池液FITC的熒光強度的變化和門靜脈壁上及乳糜池壁上FITC的變化有相同的趨勢。3.在掃描電鏡下，注射后的5min時納米金標記的內毒素開始在腹膜淋巴孔附近黏附，聚集，30min時腹膜淋巴孔的內毒素的量逐漸上升并達到峰值，1h時出現下降趨勢(與30min比較，P＞0.05)，2h下降明顯（與30min比較，P＜0.05）。乳糜池的情況為:

9、注射后的5min時，乳糜池中出現了少量納米金標記的內毒素，30min逐漸上升，1h時乳糜池中內毒素到達峰值，2h時出現下降趨勢（與1h比較，P＞0.05），3h下降明顯（與1h比較，P＜0.05）。門靜脈則是:注射后的5min時，門靜脈中很難觀察到納米金標記的內毒素，隨著時間的推進，2h時門靜脈中內毒素到達峰值，3h出現下降（與2h比較，P＜0.05）。在實驗的5min、30min、1h、2h、3h各個時相點，門靜脈的內毒素均低于腹膜淋

10、巴孔及乳糜池(P＜0.05)。在透射電鏡下，我們發(fā)現了納米金標記的內毒素出現在腹膜淋巴孔中，同時在其下的腹膜下小管，淋巴引流單位和毛細淋巴管中均發(fā)現了納米金標記的內毒素。
　　結論:通過本課題的研究，初步得到以下結論:1.以腹膜淋巴孔為結構基礎的腹膜淋巴回流途徑存在于大鼠體內。2.腹膜淋巴孔回流途徑對腹腔游離內毒素具有轉運作用的。3.腹膜淋巴回流途徑對腹腔游離內毒素的轉運是通過腹膜淋巴孔，經腹膜下小管，淋巴引流單位進入毛細淋巴管，