腹膜淋巴孔途徑及其對腹腔游離內(nèi)毒素轉(zhuǎn)運(yùn)的超微形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的:腹膜淋巴孔是由腹膜間皮細(xì)胞伸出的胞質(zhì)突起與相鄰細(xì)胞的胞質(zhì)突起相互連接而成，為毛細(xì)淋巴管在腹膜間皮面上的開口。作為人體的一種恒定結(jié)構(gòu)，腹膜淋巴孔的形態(tài)結(jié)構(gòu)被許多研究人員關(guān)注，眾多的實(shí)驗(yàn)已被證實(shí)腹膜淋巴孔與腹水轉(zhuǎn)歸、腹腔內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，但腹膜淋巴孔與腹腔內(nèi)感染性物質(zhì)內(nèi)毒素的轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)系資料甚少。本實(shí)驗(yàn)采用電鏡技術(shù)，對腹膜淋巴孔途徑進(jìn)行超微形態(tài)學(xué)觀察，通過腹腔內(nèi)注射示蹤標(biāo)記的外源性內(nèi)毒素，連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察其在腹膜淋巴孔途徑中的轉(zhuǎn)運(yùn)及特點(diǎn)

2、，并與門靜脈途徑作差異性比較，為進(jìn)一步開展腹膜淋巴孔的功能研究提供證據(jù)。
　　方法:1.結(jié)合文獻(xiàn)資料，獲取大鼠腹膜組織，透射電鏡(ScanningElectron Microscope，SEM)觀察腹膜淋巴孔的超微結(jié)構(gòu)，掃描電鏡(Transmission Electron Microscope，TEM)觀察腹膜淋巴孔分布、大小及形態(tài)。使用Elescope計(jì)算機(jī)圖像處理軟件分析掃描電鏡下腹膜淋巴孔圖像，應(yīng)用SPSS19.0軟件對圖像

3、數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到大鼠腹膜淋巴孔的平均直徑(μ m)及分布密度(/0.01mm2)等指標(biāo)。2.在大鼠腹腔內(nèi)注射FITC標(biāo)記的內(nèi)毒素，分別于注射后的5min、30min、1h、2h、3h取大鼠腹膜、乳糜池、門靜脈組織及門靜脈血、乳糜池液，各組織行冰凍切片，熒光顯微鏡觀察FITC標(biāo)記的內(nèi)毒素在腹膜、乳糜池、門靜脈的轉(zhuǎn)運(yùn)情況，使用IMAGE-PRO PLUS6.0圖像處理軟件分析腹膜上、乳糜池壁、門靜脈壁的FITC的熒光強(qiáng)度，使用熒光分光

4、光度計(jì)分析門靜脈血及乳糜池液的FITC的熒光強(qiáng)度，應(yīng)用SPSS19.0軟件對得到數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并做差異性比較。3.在大鼠腹腔內(nèi)注射納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素，分別于注射后的5min、30min、1h、2h、3h取大鼠的腹膜、乳糜池、門靜脈組織，應(yīng)用掃描電鏡及透射電鏡同時(shí)觀察納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素在腹膜淋巴孔途徑動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)運(yùn)情況，使用Elescope計(jì)算機(jī)圖像處理軟件分析掃描電鏡下腹膜淋巴孔、乳糜池、門靜脈上的納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素的分布密度（/0.01

5、mm2），使用SPSS19.0軟件對得到的分布密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并對納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素在腹膜淋巴孔途徑及門脈途徑的轉(zhuǎn)運(yùn)做差異性比較。
　　結(jié)果:1.在掃描電鏡下，可以觀察到腹膜淋巴孔是位于腹膜立方間皮細(xì)胞之間的空洞，是由立方間皮細(xì)胞伸出的指狀突起與相鄰的細(xì)胞之間的指狀胞質(zhì)突起相連而成的，呈圓形、橢圓形，平均直徑約為8.23±2.34μm，分布密度為1.2±0.7(/0.01mm2)，其底部有間皮下結(jié)締組織纖維。在透射電鏡下，腹膜淋

6、巴孔是由腹膜立方間皮細(xì)胞及其胞質(zhì)突起圍繞而成的，立方間皮細(xì)胞胞體清晰，細(xì)胞核較大，核仁明顯，立方間皮細(xì)胞邊緣發(fā)出胞質(zhì)突起，腹膜淋巴孔是毛細(xì)淋巴管在腹膜上的出口，并且向下通過腹膜下小管和淋巴引流單位(LDU)、淋巴陷窩與毛細(xì)淋巴管相連。2.熒光顯微鏡下，注射后的5min時(shí)，腹膜上即可出現(xiàn)FITC標(biāo)記的內(nèi)毒素，30min時(shí)腹膜上內(nèi)毒素的吸附量逐漸上升并達(dá)到峰值，1h時(shí)開始出現(xiàn)下降趨勢（與30min相比，P＞0.05），2h后明顯下降（與30

7、min相比，P＜0.05）。每個(gè)時(shí)相點(diǎn)，乳糜池的變化如下:注射后的5min，乳糜池中出現(xiàn)了少量FITC標(biāo)記的內(nèi)毒素，30min逐漸上升，1h到達(dá)峰值，2h出現(xiàn)下降趨勢（與1h相比，P＞0.05），3h下降明顯（與1h相比，P＜0.05）。門靜脈的情況則是:注射后的5min，門靜脈中很難觀察到FITC標(biāo)記的內(nèi)毒素，隨著時(shí)間的推進(jìn)，2h時(shí)門靜脈中內(nèi)毒素到達(dá)峰值，3h出現(xiàn)下降（與2h比較，P＜0.05）。在實(shí)驗(yàn)的5min、30min、1h、2

8、h、3h各個(gè)時(shí)相點(diǎn)，門靜脈的內(nèi)毒素的表達(dá)均低于乳糜池(P＜0.05)。熒光分光光度計(jì)分析門靜脈血及乳糜池液FITC的熒光強(qiáng)度的變化和門靜脈壁上及乳糜池壁上FITC的變化有相同的趨勢。3.在掃描電鏡下，注射后的5min時(shí)納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素開始在腹膜淋巴孔附近黏附，聚集，30min時(shí)腹膜淋巴孔的內(nèi)毒素的量逐漸上升并達(dá)到峰值，1h時(shí)出現(xiàn)下降趨勢(與30min比較，P＞0.05)，2h下降明顯（與30min比較，P＜0.05）。乳糜池的情況為:

9、注射后的5min時(shí)，乳糜池中出現(xiàn)了少量納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素，30min逐漸上升，1h時(shí)乳糜池中內(nèi)毒素到達(dá)峰值，2h時(shí)出現(xiàn)下降趨勢（與1h比較，P＞0.05），3h下降明顯（與1h比較，P＜0.05）。門靜脈則是:注射后的5min時(shí)，門靜脈中很難觀察到納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素，隨著時(shí)間的推進(jìn)，2h時(shí)門靜脈中內(nèi)毒素到達(dá)峰值，3h出現(xiàn)下降（與2h比較，P＜0.05）。在實(shí)驗(yàn)的5min、30min、1h、2h、3h各個(gè)時(shí)相點(diǎn)，門靜脈的內(nèi)毒素均低于腹膜淋

10、巴孔及乳糜池(P＜0.05)。在透射電鏡下，我們發(fā)現(xiàn)了納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素出現(xiàn)在腹膜淋巴孔中，同時(shí)在其下的腹膜下小管，淋巴引流單位和毛細(xì)淋巴管中均發(fā)現(xiàn)了納米金標(biāo)記的內(nèi)毒素。
　　結(jié)論:通過本課題的研究，初步得到以下結(jié)論:1.以腹膜淋巴孔為結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的腹膜淋巴回流途徑存在于大鼠體內(nèi)。2.腹膜淋巴孔回流途徑對腹腔游離內(nèi)毒素具有轉(zhuǎn)運(yùn)作用的。3.腹膜淋巴回流途徑對腹腔游離內(nèi)毒素的轉(zhuǎn)運(yùn)是通過腹膜淋巴孔，經(jīng)腹膜下小管，淋巴引流單位進(jìn)入毛細(xì)淋巴管，