細(xì)菌內(nèi)毒素體外誘導(dǎo)鯽魚淋巴細(xì)胞凋亡及其機(jī)制初步研究.pdf

1、加夕了1破碩士一學(xué)位論文細(xì)菌內(nèi)毒素體外誘導(dǎo)鯽魚淋巴細(xì)胞凋亡及其機(jī)制初步研究姓名：專業(yè)：導(dǎo)師：所在學(xué)院：楊再峰細(xì)胞生物學(xué)邵健忠教授生命科學(xué)學(xué)院提交日期2005年6月浙江杭蜘中文摘要以鯽魚頭腎淋巴細(xì)胞為研究對(duì)象，用細(xì)菌內(nèi)毒素體外誘導(dǎo)其凋亡，通過熒光染色、DNA電泳、TUNEL、電鏡以及流式細(xì)胞儀分析等多種凋亡檢測(cè)方法，檢測(cè)凋亡發(fā)生情況。結(jié)果顯示，在10IJg／ml以上濃度的內(nèi)毒素作用18后或以100ug／ml濃度的LPS作用6h以上，淋巴細(xì)

2、胞即可出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)變化，表現(xiàn)為染色質(zhì)凝集和周邊化，核斷裂，形成凋亡小體，DNA發(fā)生特異降解產(chǎn)生典型的“梯狀”電泳圖譜，呈現(xiàn)TUNEL陽性標(biāo)記等，并通過流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)這種凋亡具有時(shí)間和劑量的依賴性。在確證內(nèi)毒素能誘導(dǎo)鯽魚淋巴細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)上，對(duì)內(nèi)毒素引起淋巴細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制和基因表達(dá)變化作了研究。結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的內(nèi)毒素誘導(dǎo)不同時(shí)間后，鯽魚淋巴細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位(△甲)和ATP含量明顯F降，而氧自由基濃度明顯上升，提示線

3、粒體死亡通路可能是LPS誘導(dǎo)鯽魚淋巴細(xì)胞凋亡的機(jī)制。在凋亡相關(guān)基因的研究中，發(fā)現(xiàn)在100ug／mlLPS誘導(dǎo)6、12、24h后發(fā)生凋亡過程中，細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)生了不同的變化。其中TNF—a基因的表達(dá)在正常對(duì)照組和三個(gè)時(shí)間段的誘導(dǎo)組中沒有發(fā)生明顯變化，而Bcl家族的抑制凋亡基因Bcl2和促凋亡基因Bax的表達(dá)量發(fā)生了顯著的變化，Bcl一2隨著誘導(dǎo)時(shí)聞的延長表達(dá)下降，麗Bax表達(dá)增加。對(duì)NO合成酶(NOS)基因表達(dá)韻檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)

4、照組相比，NOS基因在誘導(dǎo)組中表達(dá)的變化不明顯，提示NO與淋巴細(xì)胞凋亡的關(guān)系不大。魚類淋巴細(xì)胞凋亡過程中TNF一Ⅸ和NOS基因表達(dá)的變化不同于巨噬細(xì)胞的研究結(jié)果，提示內(nèi)毒素誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的機(jī)制不同于巨噬細(xì)胞?？偨Y(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為內(nèi)毒素能在體外直接誘導(dǎo)魚類淋巴細(xì)胞凋亡，而凋亡的發(fā)生涉及線粒體信號(hào)通路和Bcl家族相關(guān)基因的調(diào)控，內(nèi)毒素誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制不同于巨噬細(xì)胞。關(guān)鍵詞：細(xì)菌內(nèi)毒素；鲴魚；淋巴細(xì)胞：凋亡；線粒體膜電位(△掣)