基于骨代謝探討腎陰虛證與腎陽虛證PMOP的差異及兩種補腎法的干預機制.pdf

1、目的:
　　分析絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(Postmenopausal osteoporosis，PMOP)中屬于腎陰虛證與腎陽虛證患者臨床基本資料、骨密度和骨標志物四項等指標，探討兩種證型患者間的差異。
　　基于Ⅰ型膠原合成、交聯(lián)與基質(zhì)礦化探討補腎陰法與補腎陽法治療PMOP的療效及其作用機制的差異。
　　方法:
　　選擇于廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院住院治療，并診斷為PMOP的患者，根據(jù)中醫(yī)證型診斷標準納入腎陰虛證與腎陽

2、虛證患者，收集兩種證型患者年齡、絕經(jīng)年齡、絕境年限、體重、身高、BMI等臨床資料，并檢測患者骨密度(Bone mineraldensity，BMD)、骨礦含量(Bone mineral content，BMC)、T值、Ⅰ型前膠原氨基端延長肽(Procollagen I N-terminal peptide，PINP)、β-Ⅰ型膠原羧基末端肽(β-cross linked C-telopeptide of typeⅠ collagen，β

3、-CTX)、N端骨鈣素(N-MID)、25-羥維生素D（25-OH Vitamin D）。采用獨立樣本t檢驗比較兩種證型患者間各臨床資料及相關指標間的差異。
　　150只雌性SD大鼠隨機分為五組:模型組、假手術(shù)組、西藥組、補腎陰組和補腎陽組。建立雙側(cè)大鼠卵巢切除模型，三個月后，給予藥物灌胃干預。西藥組予福善美、補腎陰組予六味地黃丸、補腎陽組予桂附地黃丸、假手術(shù)組和模型組予以生理鹽水。藥物干預三個月后進行指標檢測，采用Lunar雙能

4、X線骨密度儀檢測大鼠股骨近端骨密度，使用骨組織石蠟切片HE染色法觀察大鼠股骨近端松質(zhì)骨的組織形態(tài)學，采用Elisa法檢測大鼠血清骨代謝標志物骨組織特異性堿性磷酸酶(Bone-specificalkphase，B-ALP)、PINP、NTX和CTX的含量，采用RT-PCR法檢測大鼠骨組織中調(diào)控Ⅰ型膠原合成(COLIA1、COLIA2)，Ⅰ型膠原交聯(lián)(Lhx9)和基質(zhì)礦化(Bglap、Ibsp、Smad3、Runx-2)的相關基因的表達情況

5、。采用單因素方差分析探討各組間相關指標的差異。
　　成果:
　　共納入61例漢族PMOP癥患者，其中診斷為腎陰虛證者28例，腎陽虛證者33例。腎陰虛證患者與腎陽虛證患者在年齡、絕經(jīng)年限、體重、身高、BMI方面的差異采用獨立樣本t檢驗，結(jié)果示兩組患者在各項基線資料上的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。以BMI等于25作為分類標準，對患者進行分類，其中腎陰虛組患者BMI大于等于25的數(shù)量多于腎陽虛組，兩組間差異的比較采用卡方檢驗

6、，結(jié)果示，兩組間體重超重人數(shù)所占比例的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。兩組間BMD和BMC的比較采用獨立樣本t檢驗，統(tǒng)計結(jié)果示兩組間BMC的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。兩組間BMD的差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明補腎陰組的BMD明顯高于補腎陽組。β-CTX、N-MID、25-OH VitD三項指標在兩組間的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。兩組間PINP水平的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明腎陰虛組的PINP

7、水平明顯大于腎陽虛組。
　　大鼠卵巢切除后，模型組骨密度明顯低于假手術(shù)組（P＜0.05），給予藥物（福善美、桂附地黃丸、六位地黃丸）干預后大鼠骨密度明顯高于模型組（P＜0.05），西藥組骨密度明顯高于中藥組骨密度（P＜0.05），補腎陽組和補腎陰組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在各組大鼠股骨近端骨組織形態(tài)學比較中，與假手術(shù)組相比，模型組骨小梁數(shù)量減少，排列不齊，間隙增寬，可見斷裂導致的骨性連接缺失。藥物（福善美、桂附地黃

8、丸、六位地黃丸）干預后，與模型組相比，骨小梁數(shù)量增多，排列整齊，間隙變窄，無可見斷裂。與假手術(shù)組相比，模型組中基質(zhì)礦化相關基因Lhx9的表達明顯降低(P＜0.05)。藥物干預組中，補腎陽組的膠原合成相關基因COLIA1的表達較假手術(shù)組明顯增高（P＜0.05），西藥組和補腎陰組中COLIA2基因的表達較模型組明顯增高（P＜0.05)，補腎陽組中Lhx9基因的表達較模型組明顯增高（P＜0.05）。與西藥組相比，補腎陽組中COLIA1和Lhx

9、9基因的表達明顯增加（P＜0.05）。補腎陽組和補腎陰組相比，COLIA1和Lhx9基因的表達明顯增高（P＜0.05），COlIA2明顯降低（P＜0.05）。與假手術(shù)組相比模型組中Bglap和Runx-2基因的表達明顯降低（P＜0.05）。藥物干預組中，與模型組相比，西藥組和補腎陽組Bglap的表達明顯增高（P＜0.05），補腎陰組Ibsp的表達明顯增高（P＜0.05），三組的Smad3的表達均明顯增高（P＜0.05）。與西藥組相比，補

10、腎陽組的Smad3基因與補腎陰組的Ibsp基因表達均明顯增高（P＜0.05）。和補腎陰組相比，補腎陽組中Bglap基因的表達明顯增高（P＜0.05），Ibsp基因的表達明顯降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　腎陰虛證與腎陽虛證PMOP患者在BMI、BMD及骨標志物PINP等方面存在著明顯差異，肥胖及骨形成速率的增加可能是腎陰虛證患者BMD明顯高于腎陽虛證患者的可能原因。
　　補腎陰法和補腎陽法可通過提高去勢大鼠骨密