Bcl-2高表達(dá)誘導(dǎo)頭頸部鱗癌細(xì)胞部分EMT、促進(jìn)其侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制研究.pdf

1、頭頸部鱗癌(Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是一種嚴(yán)重威脅人類生命和健康的惡性表皮腫瘤,為世界六大常見惡性腫瘤之一。由于頭頸部特殊的解剖結(jié)構(gòu)和復(fù)雜的功能,HNSCC的診斷與治療一直是我們面臨的挑戰(zhàn)之一。對(duì)于早期HNSCC,手術(shù)或放療均能獲得良好的效果;但遺憾的是60％的HNSCC就診時(shí)已屬晚期(Ⅲ、Ⅳ期),5年生存率徘徊在10％～20％之間,況且,在過去50年,生存率仍然沒有明顯提

2、高。HNSCC易發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移,而且高頻率的微轉(zhuǎn)移臨床難以發(fā)現(xiàn)。因此,揭示HNSCC侵襲與轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要的意義。
　　Bcl-2基因是一種重要的抗凋亡的基因,在許多生物過程如胎盤的發(fā)育、細(xì)胞歸巢、腫瘤多藥耐藥、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、血管新生以及基因調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。50％以上的腫瘤有Bcl-2高表達(dá),HNSCC也不例外,通常Bcl-2高表達(dá)的腫瘤病人療效以及病人預(yù)后差,且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而,Bcl-2高表達(dá)促進(jìn)HNSCC

3、侵襲與轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未闡明。本文研究Bcl-2高表達(dá)在HNSCC侵襲與轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制。
　　為探討B(tài)cl-2高表達(dá)對(duì)HNSCC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響,在建立Bcl-2高表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HNSCC細(xì)胞株的基礎(chǔ)上,皮下接種腫瘤細(xì)胞于BALB/c鼠,觀察Bcl-2高表達(dá)對(duì)HNSCC細(xì)胞體內(nèi)致瘤能力的影響;BALB/c鼠尾靜脈注射腫瘤細(xì)胞,觀察Bcl-2高表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移能力的影響;采用細(xì)胞侵襲、運(yùn)動(dòng)和遷移試驗(yàn)等方法分析Bcl-

4、2高表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞體外侵襲與轉(zhuǎn)移能力的影響;應(yīng)用FACS檢測(cè)Bcl-2高表達(dá)對(duì)細(xì)胞表面黏附分子(Integriα2,Integrinα3,Integrinαv,Integrinα5,Integrinα6,Integrinβ1和Integrinβ4)表達(dá)的影響。研究結(jié)果顯示:Bcl-2高表達(dá)增強(qiáng)HNSCC細(xì)胞的體內(nèi)致瘤能力和肺轉(zhuǎn)移能力,提高HNSCC細(xì)胞的體外運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲能力,降低HNSCC細(xì)胞黏附能力和細(xì)胞表面Integrinα2和

5、Integriuαβ1的表達(dá)。
　　為研究Bcl-2高表達(dá)促進(jìn)HNSCC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制,應(yīng)用Western blotting,FACS,Immunostaining,RT-PCR和Real-time PCR等方法檢測(cè)Bcl-2高表達(dá)對(duì)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白(E-cadherin,Cytokeratin,ZO1和Dsg3等)和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白(N-cadherin,Fibronectin和Vimentin)表達(dá)的影響等;采用熒光素酶

6、報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析Bcl-2對(duì)N-cadherin啟動(dòng)子活性的影響等:明膠酶譜法研究Bcl-2高表達(dá)對(duì)金屬基質(zhì)蛋白質(zhì)酶MMP-9的影響;應(yīng)用siRNA下調(diào)N-cadherin的表達(dá),探討N-cadherin對(duì)轉(zhuǎn)移和侵襲的影響;用ERK,FGFR,EGFR阻斷劑U0126,PD174073和AG1478分別阻斷其生物學(xué)功能,觀察相關(guān)信號(hào)通路在Bcl-2促進(jìn)HNSCC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。結(jié)果顯示:Bcl-2高表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生了類似上皮.

7、間質(zhì)轉(zhuǎn)型(EMT)的形態(tài)變化,下調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白(E-cadherin,Cytokeratin,ZO1和Dsg3等)的表達(dá),上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白(N-cadherin,Fibroneetin和Ximentin)的表達(dá);Bcl-2能激活N-cadherin的啟動(dòng)子的活性并上調(diào)MMP-9的表達(dá);Bcl-2通過N-cadherin/FGFR/ERK信號(hào)通路促進(jìn)HNSCC細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移。
　　研究表明:(1)Bcl-2高表達(dá)增強(qiáng)HNSC