人IL-12基因瘤內(nèi)轉(zhuǎn)HCC-hu-PBL-NOD-SCID小鼠前后NK細(xì)胞功能的變化.pdf

1、目的：通過研究原發(fā)性肝癌及癌旁組織NK細(xì)胞活化性受體與抑制性受體表達(dá)情況，分析探討這兩種受體含量變化在原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)系及其臨床價(jià)值；通過實(shí)驗(yàn)研究白細(xì)胞介素12基因瘤內(nèi)注射對肝癌荷瘤人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠微環(huán)境中NK細(xì)胞表達(dá)的變化，及其作用機(jī)理。
　　方法：1、流式細(xì)胞儀、免疫組化法檢測人原發(fā)性肝癌及癌旁組織NK細(xì)胞活化性受體與抑制性受體表達(dá)情況；2、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2細(xì)胞，成瘤后

2、腹腔注射人外周血淋巴細(xì)胞，構(gòu)建人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠復(fù)合模型；隨機(jī)將模型小鼠分為四組，在第1、4、7天分別瘤內(nèi)注射經(jīng)致死量射線照射的轉(zhuǎn)染有人IL-12基因的肺癌細(xì)胞株9597/IL-12、空載體肺癌細(xì)胞株9597/plasmid、IL-12和PBS；觀測小鼠瘤體積的變化，以及小鼠體重、一般狀況的變化；3、ELISA檢測荷瘤小鼠微環(huán)境中IL-12、INF-γ水平；4、免疫組化法檢測荷瘤小鼠微環(huán)境中NK細(xì)胞受體前后變化

3、。
　　結(jié)果：1、原發(fā)性肝癌的NK細(xì)胞數(shù)量明顯低于癌旁對照組(P<0.01)，原發(fā)性肝癌組織活化性受體NKG2D、NKP44明顯低于癌旁組織(P<0.05)，而抑制性受體CD158b、CD159a明顯高于癌旁組織(P<0.05)。NKG2D、NKP30、NKP44的表達(dá)與肝癌臨床分期負(fù)相關(guān)，即在早中期的患者含量較高，越晚期患者肝癌組織中NKG2D、NKP30、NKP44含量越低（P<0.05）NK細(xì)胞中抑制性受體CD158b、CD

4、159a的含量在越晚期患者肝癌組織中含量越高（P<0.05）且與AFP高低有關(guān)及HBSAg的感染有聯(lián)系。而NK受體的表達(dá)在是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度之間以及不同的病灶大小之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2細(xì)胞并腹腔內(nèi)注射人PBL后總體成瘤率100％，四組小鼠瘤體積以及小鼠體重、一般狀況變化不明顯；3、腫瘤微環(huán)境中，基因組、IL-12組小鼠IL-12、INF-γ水平高于空載體組和對照組；4、

5、免疫組化法檢測荷瘤小鼠瘤組織及脾臟前后NK細(xì)胞受體的變化：活化性受體NKG2D、NKP44、NKP30的表達(dá)較前升高，IL-12基因組和IL-12組治療前后有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；NKP46的表達(dá)未見明顯升高，治療前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而抑制性受體CD158b、CD159a（NKG2A）表達(dá)受到抑制，治療前后有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1、人原發(fā)性肝癌發(fā)病可能與NK細(xì)胞減低及NK細(xì)胞活化性受體表達(dá)降低、抑制性受體表達(dá)升高有關(guān)；2、人IL-12基因