MicroRNa-21通過調(diào)控PDCD4及PTEN對DLBCL增殖、侵襲、凋亡的影響.pdf

1、目的: miR-21在參與細胞中多種過程，通過抑制靶基因的表達來影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)中，它的作用機制仍不清楚，尚無關于miR-21和DLBCL細胞表型之間關系的報道。本實驗旨在研究ABC-型DLBCL中能否通過miR-21對PDCD4及PTEN兩種基因的調(diào)控來影響腫瘤的增殖、侵襲能力和凋亡。探討以miR-21作為靶分子，對DLBCL基因治療的可能性。
　　研究方法:
　　1)采用QRT-PC

2、R比較ABC-type及GCB-type中miR-21的表達水平;
　　2)采用熒光素酶報告實驗直接證明PDCD4及PTEN是miR-21靶基因;
　　3)轉染OCI-LY3及OCI-LY10后，運用QRT-PCR檢測OCI-LY3及OCI-LY10miR-21含量的改變;
　　4)采用QRT-PCR法和Western blot法分別檢測轉染細胞中PDCD4和PTENmRNA和蛋白表達的變化;
　　5)采用MTT

3、法檢測轉染后OCI-LY3、OCI-LY10細胞增殖水平的變化;
　　6)采用Transwell法檢測轉染后對OCI-LY3、OCI-LY10細胞的體外侵襲能力的影響;
　　7)采用流式細胞術檢測轉染后對OCI-LY3、OCI-LY10細胞的凋亡的影響;
　　結果:
　　1)QRT-PCR結果表明ABC-型DLBCL中miR-21的表達明顯高與GCB-型DLBCL;
　　2)熒光素酶報告實驗證明了PDCD4

4、及PTEN是miR-21靶基因;
　　3)QRT-PCR法和Westem blot法顯示轉染后隨著細胞中miR-21的量的減少，PDCD4和PTEN的蛋白表達明顯降低，但PDCD4和PTEN的mRNA的量變化不明顯;
　　4)MTT結果顯示，在轉染24h、48 h、72 h和96 h后，OCI-LY3/anti-miR-21細胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY3/inhibitor control分別下降至8

5、7％(P＜0.01),85％(P＜0.01),77％（P＜0.01）; OCI-LY10/anti-miR-21細胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY10/inhibitor control分別下降至71％(P＜0.01),73％(P＜0.01),67％（P＜0.01）;
　　5)細胞體外侵襲力測定結果顯示:OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21組中穿膜細胞的數(shù)目分別是OCI

6、-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control組的71％(P＜0.05)和60％(P＜0.05)
　　6)流式細胞術顯示:OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21組細胞的凋亡顯著高于OCI-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control組。
　　結論:
　　RNA沉默技術特異性降