MicroRNa-21通過調(diào)控PDCD4及PTEN對(duì)DLBCL增殖、侵襲、凋亡的影響.pdf

1、目的: miR-21在參與細(xì)胞中多種過程，通過抑制靶基因的表達(dá)來影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)中，它的作用機(jī)制仍不清楚，尚無關(guān)于miR-21和DLBCL細(xì)胞表型之間關(guān)系的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在研究ABC-型DLBCL中能否通過miR-21對(duì)PDCD4及PTEN兩種基因的調(diào)控來影響腫瘤的增殖、侵襲能力和凋亡。探討以miR-21作為靶分子，對(duì)DLBCL基因治療的可能性。
　　研究方法:
　　1)采用QRT-PC

2、R比較ABC-type及GCB-type中miR-21的表達(dá)水平;
　　2)采用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)直接證明PDCD4及PTEN是miR-21靶基因;
　　3)轉(zhuǎn)染OCI-LY3及OCI-LY10后，運(yùn)用QRT-PCR檢測(cè)OCI-LY3及OCI-LY10miR-21含量的改變;
　　4)采用QRT-PCR法和Western blot法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中PDCD4和PTENmRNA和蛋白表達(dá)的變化;
　　5)采用MTT

3、法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后OCI-LY3、OCI-LY10細(xì)胞增殖水平的變化;
　　6)采用Transwell法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后對(duì)OCI-LY3、OCI-LY10細(xì)胞的體外侵襲能力的影響;
　　7)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后對(duì)OCI-LY3、OCI-LY10細(xì)胞的凋亡的影響;
　　結(jié)果:
　　1)QRT-PCR結(jié)果表明ABC-型DLBCL中miR-21的表達(dá)明顯高與GCB-型DLBCL;
　　2)熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證明了PDCD4

4、及PTEN是miR-21靶基因;
　　3)QRT-PCR法和Westem blot法顯示轉(zhuǎn)染后隨著細(xì)胞中miR-21的量的減少，PDCD4和PTEN的蛋白表達(dá)明顯降低，但PDCD4和PTEN的mRNA的量變化不明顯;
　　4)MTT結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染24h、48 h、72 h和96 h后，OCI-LY3/anti-miR-21細(xì)胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY3/inhibitor control分別下降至8

5、7％(P＜0.01),85％(P＜0.01),77％（P＜0.01）; OCI-LY10/anti-miR-21細(xì)胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY10/inhibitor control分別下降至71％(P＜0.01),73％(P＜0.01),67％（P＜0.01）;
　　5)細(xì)胞體外侵襲力測(cè)定結(jié)果顯示:OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21組中穿膜細(xì)胞的數(shù)目分別是OCI

6、-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control組的71％(P＜0.05)和60％(P＜0.05)
　　6)流式細(xì)胞術(shù)顯示:OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21組細(xì)胞的凋亡顯著高于OCI-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control組。
　　結(jié)論:
　　RNA沉默技術(shù)特異性降