膠質(zhì)細(xì)胞α7-nAChR激活在削弱Aβ介導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞失能中作用的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文膠質(zhì)細(xì)胞a7nAChR激活在削弱Ap介導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞失能中作用的研究Thestudyofactivatedgliala7一nAChRontheinhibitionof13amyloidmediatedneuralstemcelldisability課題來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金(30973162)廣東省自然科學(xué)基金(07005203)學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院朱寧王勇教授藥劑學(xué)學(xué)術(shù)型

2、碩士第二臨床醫(yī)學(xué)院年月日廣州摘要形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞都存在a7nAChR的表達(dá)，其主要功能是實(shí)現(xiàn)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的信號(hào)傳遞。巨噬細(xì)胞a7一nAChR激活后降低了炎性介質(zhì)的表達(dá)和釋放，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞與巨噬細(xì)胞在炎性反應(yīng)中功能相似，膠質(zhì)細(xì)胞it7一nAChR激活后炎性介質(zhì)的分泌可能也會(huì)減少。在本研究中，我們用transwell板建立膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞的體外共培養(yǎng)體系，神經(jīng)干細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞分別培養(yǎng)在transwell板的上層和下層

3、，通過在下層的膠質(zhì)細(xì)胞中加入AB模擬AD炎性微環(huán)境，并經(jīng)液相芯片技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡，探討A13刺激膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)對(duì)神經(jīng)千細(xì)胞的影響。通過加入尼吉丁激活膠質(zhì)細(xì)胞a7nAChR，研究膠質(zhì)細(xì)胞a7nAChR激活后對(duì)炎性反應(yīng)的抑制及對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的保護(hù)作用。在體外研究的基礎(chǔ)上，我們通過立體定位技術(shù)注射Ap到大鼠海馬中，A13刺激膠質(zhì)細(xì)胞分泌炎性因子，借此構(gòu)建AD炎性模型，并通過皮下注射尼古丁方

4、式激活膠質(zhì)細(xì)胞a7nAChR。BrdU(Bromodeoxyuridine，BrdU)標(biāo)記后的外源性神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)立體定位技術(shù)注入海馬內(nèi)，經(jīng)免疫熒光雙染技術(shù)檢測(cè)外源性神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)的增殖和分化情況，明確膠質(zhì)細(xì)胞a7nAChR激活后對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響。方法1海馬NSCs培養(yǎng)及鑒定出生24hSD大鼠置于75％酒精中浸泡消毒30s。無(wú)菌條件下斷頭耿全腦置于冰PBS中，分離出海馬組織，移液槍輕輕吹打開海馬組織。胰蛋白酶消化，置細(xì)胞培養(yǎng)箱