神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的干細(xì)胞抗原表型研究.pdf

1、目的：檢測新生大鼠大腦皮質(zhì)來源的星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的干細(xì)胞抗原表達(dá),為進(jìn)一步深入研究這兩種膠質(zhì)細(xì)胞的應(yīng)用意義提供生物學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴取新生大鼠大腦皮質(zhì)進(jìn)行原代混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),根據(jù)各種膠質(zhì)細(xì)胞生長時(shí)間差異及細(xì)胞的粘附特性不同,通過機(jī)械震蕩和差速貼壁方法分離純化O-2A祖細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia,MGs)和1型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type1 astrocytes,T1As),使用細(xì)胞特異性抗體進(jìn)行鑒定。⑵收

2、集O-2A祖細(xì)胞接種于12孔培養(yǎng)板或/和包被PLL的蓋玻片上,培液為DMEM/F-12、2％B27、1％N2、10ng/ml PDGF,進(jìn)一步純化O-2A祖細(xì)胞。在含20％FCS的培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)O-2A祖細(xì)胞向2型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type2 astrocytes,T2As)分化,使用細(xì)胞特異性抗體進(jìn)行鑒定。⑶采用免疫熒光標(biāo)記染色方法,檢測干細(xì)胞的標(biāo)記分子巢蛋白(nestin)、階段特異性胚胎抗原-1(SSEA-1)及蛋白聚糖NG2在星形膠

3、質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：①通過機(jī)械震蕩和差速貼壁方法,有效分離了O-2A祖細(xì)胞及1型星形膠質(zhì)細(xì)胞,它們具有典型的形態(tài)特征,表達(dá)各自的細(xì)胞特異性分子,O-2A祖細(xì)胞表達(dá)A285,1型星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)GFAP。②通過機(jī)械震蕩和差速貼壁方法,有效分離了純化的小膠質(zhì)細(xì)胞,它們具有典型的形態(tài)特征,并表達(dá)其細(xì)胞特異性分子OX42。③分離的O-2A祖細(xì)胞經(jīng)PDGF作用,增殖而不出現(xiàn)分化,從而O-2A祖細(xì)胞得到純化。④O-2

4、A祖細(xì)胞以無血清培養(yǎng)液培養(yǎng),迅速分化為成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞；在含高達(dá)15％～20％FCS的培液中生長,分化為2型星形膠質(zhì)細(xì)胞,特異性抗原表達(dá)為A2B5+/GFAP+。⑤免疫熒光標(biāo)記染色顯示:分化成熟的2型星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)nestin,SSEA-1及NG2,小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)nestin,SSEA-1及NG2,1型星形膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)干細(xì)胞抗原標(biāo)志物。
　　 結(jié)論：神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記分子nestin,SSEA-1及NG2在膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)存在