神經(jīng)干細胞及神經(jīng)生長因子對內耳作用的研究.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文神經(jīng)干細胞及神經(jīng)生長因子對內耳作用的研究姓名：李宏慧申請學位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：董明敏;朱麗雅20060501鄭州大學2 0 0 6 年碩士研究生畢業(yè)論文 神經(jīng)干細胞及N G F 對內耳作用的研究本實驗分為三部分。第一部分：細胞培養(yǎng)。從2 4 小時新生豚鼠海馬組織中分離得到神經(jīng)干細胞，用神經(jīng)干細胞篩選培養(yǎng)基進行體外培養(yǎng)，用N e s t i n免疫組化染色鑒定神經(jīng)千細胞特異性標志物巢素蛋白；胎牛血清

2、培養(yǎng)基誘導其分化并觀察分化細胞形態(tài)；B r d u 標記神經(jīng)干細胞用于移植。第二部分：動物實驗。選用健康、耳廓反應靈敏、無中耳感染、A B R 測試雙耳聽力在2 0 ～3 0 d B 、體重2 0 0 ～3 0 0 克純白紅目豚鼠( 雌雄不限) 作為實驗動物。隨機地分為六組，分別于術后用耳蝸組織H E 染色、基底膜鋪片、A B R 等方法觀察耳蝸組織形態(tài)、功能變化，N G F 免疫組化觀察移植前移植后及N G F 肌肉注射后耳蝸表達N

3、G F 的情況，應用B r d l l 免疫組化觀察N s C 耳蝸移植后的增殖、分化情況。I 組：空白對照組。4 只( 8 耳) ，不施加任何處理因素。I I 組：單純耳蝸底轉打孔組。8 只( 1 6 耳) ，僅施以耳蝸底轉骨壁打孔術，不致聾、不注射神經(jīng)干細胞。Ⅲ組：未致聾耳蝸底轉打孔注神經(jīng)干細胞組。8 只( 1 6耳) ，不造聾、經(jīng)耳蝸底轉骨壁打孔向內耳注入B r d u 標記的神經(jīng)干細胞。Ⅳ組：造聾組，4 只( 8 耳) ，順鉑腹

4、腔注射造聾。V 組：致聾后耳蝸底轉打孔注神經(jīng)干細胞組。8 只( 1 6 耳) ，先造成耳聾模型，而后經(jīng)耳蝸底轉骨壁打孔向內耳注入B r d u 標記的神經(jīng)干細胞。Ⅵ組：8 只( 1 6 耳) ，致聾后豚鼠肌肉注射N G F ( 注射用) ，術后2 周及4 周處死，觀察外源性N G F 對豚鼠耳蝸的保護作用及耳蝸底轉中表達N G F 的情況。第三部分：R ■P c R 實驗動物分成四組。[ 1 】正常對照組：8 只，不旌加任何處理因素：[

5、 2 】順鉑造聾組：8 只，順鉑造聾組模型，術后2 8 天處死；【3 】細胞移植組：5 只，順鉑造聾組模型，按耳蝸底轉鼓階造孔術處理，注射5 u 1 純化的N s c ，術后2 8 天處死。[ 4 】肌肉注射N G 甲組：9 只，順鉑造聾組模型，肌肉注射N G F ( O ．4 m l ／1 0 0 9 ) ，術后2 8 d 處死。通過R T - P C R 結果觀察外源性N G F 及內源性N G F 在耳蝸內的表達量。三、結果1 獲