苦參堿通過(guò)非依賴(lài)RIP3途徑誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞程序性壞死機(jī)制的研究.pdf

1、最新的流行病學(xué)研究表明膽管癌的發(fā)生率日益增加[1]，并不易被早期診斷、放化療效果差和手術(shù)后五年生存率少于5％[2]。因此，亟待明確膽管癌發(fā)生、發(fā)展和死亡的分子機(jī)制用以探索出其新的治療方案。
　　苦參堿(Matrine)是從我國(guó)傳統(tǒng)中藥苦參的干燥根中提取出的一種生物堿活性單體成分，分子式為C15H24N2O，具有廣泛的藥理學(xué)作用。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明，苦參堿能在體內(nèi)、體外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞起作用，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。然而，苦參堿誘導(dǎo)腫

2、瘤細(xì)胞死亡的作用機(jī)制尚不明確。
　　程序性壞死（necroptosis）是指由死亡受體配基啟動(dòng)、通過(guò)死亡受體介導(dǎo)的以出現(xiàn)壞死樣形態(tài)改變（包括電鏡和PI染色陽(yáng)性），可為Necrostatin-1(Nec-1)或敲除RIP1、RIP3所阻斷，作為鑒別necroptosis的基本判定標(biāo)準(zhǔn)。此外，RIP3在細(xì)胞發(fā)生necroptosis中起著關(guān)鍵作用。
　　本論文以人膽管癌細(xì)胞系QBC939為研究對(duì)象，探討苦參堿的抗腫瘤作用及其分子

3、機(jī)制。我們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿在體外可誘導(dǎo)QBC939壞死，流式細(xì)胞儀檢測(cè)PI染色呈現(xiàn)陽(yáng)性，電鏡下細(xì)胞膜完整性遭到嚴(yán)重破壞，細(xì)胞、細(xì)胞器腫脹，乃至崩解，而細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)缺乏明顯的形態(tài)改變。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿誘導(dǎo)QBC939壞死的現(xiàn)象能被Nec-1所抑制，并且通過(guò)PCR檢測(cè)確定QBC939不表達(dá)RIP3和共聚焦激光顯微鏡觀(guān)察MLKL發(fā)生膜轉(zhuǎn)位。這些結(jié)果表明苦參堿在體外是依賴(lài)于非RIP3依賴(lài)通路來(lái)誘導(dǎo)人膽管癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死。