基因芯片在篩選食管鱗癌組織及周圍正常食管黏膜組織差異表達(dá)基因中的應(yīng)用.pdf

1、食管癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一,其中河南省林州市食管癌的發(fā)病率高達(dá)150／10萬(wàn)。食管癌進(jìn)展迅速,侵襲性強(qiáng)且常伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,易復(fù)發(fā),預(yù)后差。常規(guī)手術(shù)治療及放、化療效果均不能令人滿意。所以,尋求食管癌治療的新方法為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。
　　 基因芯片亦稱DNA微陣列或寡核苷酸微陣列,是20世紀(jì)90年代后發(fā)展的一項(xiàng)DNA分析新技術(shù),它是以微陣列方式將基因片段或大量寡核菅酸有序地、高密度地排列在某種固相載體上檢測(cè)特定基因表達(dá)的一種技術(shù),如

2、:玻片、硅片和尼龍膜(一般為1cm2左右)。其檢測(cè)的基本原理是分子雜交,堿基互補(bǔ)。具體過(guò)程是:在固相支持物上排列大量的探針?lè)肿?然后利用熒光標(biāo)記序列或樣品(DNA或cDNA)同芯片上的探針?lè)肿舆M(jìn)行雜交,接著將固相支持物上沒有發(fā)生互補(bǔ)結(jié)合反應(yīng)的片段除去,利用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行掃描,再借助計(jì)算機(jī)軟件對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)、弱的分析處理,最后推測(cè)出樣品中相關(guān)基因的大量的定量信息。
　　 目前,國(guó)內(nèi)外利用基因芯片技術(shù)篩選各類腫瘤組織如:卵巢癌、

3、胃癌等的差異表達(dá)基因已經(jīng)取得一定成績(jī),食管癌方面也有少量報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)基因芯片技術(shù)對(duì)食管鱗癌的基因表達(dá)情況進(jìn)行分析,通過(guò)與正常食管黏膜組織基因表達(dá)情況對(duì)比,找到異常表達(dá)的基因,以尋找與食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的基因,為食管鱗癌的早期診斷、預(yù)防和治療提供高特異性、高敏感性的分子標(biāo)記和靶基因。
　　 方法:提取河南省腫瘤醫(yī)院5例食管鱗癌患者和周圍正常食管鱗狀上皮組織的mRNA,然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,并用單標(biāo)法將Cy3-dUTP標(biāo)記于

4、食管鱗癌組織及其周圍正常組織后制成探針,在適當(dāng)?shù)臈l件下與基因芯片進(jìn)行雜交,經(jīng)特殊掃描儀掃描后,進(jìn)行計(jì)算機(jī)軟件分析,最后得到篩選結(jié)果。另取30例標(biāo)本利用RT-PCR對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果:依Ratio實(shí)驗(yàn)組(癌組織)／對(duì)照組(正常食管組織)>4.0或<0.25的數(shù)據(jù)項(xiàng),在5例新鮮標(biāo)本的芯片雜交檢測(cè)中共篩選出1113條基因發(fā)生差異表達(dá),其中上調(diào)的有464條,下調(diào)的有649條,將這些基因按GO(gene ontology)分