通過基因芯片技術(shù)篩選肝癌差異表達(dá)基因的初步研究.pdf

1、目的：(1)研究肝癌細(xì)胞系的基因表達(dá)概況,尋找在肝癌細(xì)胞系中差異表達(dá)基因,探索肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。(2)在差異表達(dá)基因中進(jìn)一步篩選抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,探索其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：第一部分通過基因芯片技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞系Bel-7402、Hep-3B與L-02肝細(xì)胞的全基因組序列,分析其基因表達(dá)譜差異。第二部分進(jìn)一步篩選表達(dá)差異的抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,利用RT-PCR在Bel-7402、Hep-3B、L-02細(xì)胞系中對(duì)篩

2、選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行了驗(yàn)證。隨后,利用免疫組化檢測(cè)差異表達(dá)基因在20例肝癌及其癌旁組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果：第一部分在檢測(cè)的54614個(gè)探針組中,Bel-7402、Hep-3B兩株肝癌細(xì)胞與L-02肝細(xì)胞相比表達(dá)共同上調(diào)兩倍及兩倍以上的有1452個(gè)基因；表達(dá)下調(diào)2倍及2倍以上的有2054個(gè)基因。涉及凋亡、細(xì)胞粘附、細(xì)胞周期等多種生物學(xué)過程,鈣離子信號(hào)通路、G蛋白信號(hào)通路等多種信號(hào)通路。第二部分進(jìn)一步篩選出與抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)表達(dá)

3、上調(diào)的基因有12個(gè),選取其中的SODD與Survivin基因行RT-PCR與免疫組化,RT-PCR結(jié)果顯示其在Bel-7402與Hep-3B肝癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于L-02肝細(xì)胞(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示SODD與Survivin在肝癌組織中的陽性率明顯高于癌旁組織(65％vs 15％,and 75％vs 20％,P<0.05)。 結(jié)論：(1)肝癌的發(fā)生、發(fā)展是由數(shù)千個(gè)癌癥相關(guān)基因異常表達(dá)進(jìn)而引起多種生物學(xué)功能異常的綜合