長(zhǎng)期能量限制對(duì)成年雌性大鼠生殖壽命的影響.pdf

1、研究目的：探討長(zhǎng)期不同強(qiáng)度的能量限制對(duì)成年雌性大鼠生殖壽命的影響,觀察不同強(qiáng)度能量限制對(duì)卵泡發(fā)育、生育能力以及卵巢壽命的影響。
　　材料與方法：取6月齡雌性SD大鼠30只,分為對(duì)照(NC)組、能量限制(calorie restriciton,CR)20％組和CR40%組,記錄NC組每日攝食量,并將此攝食量的80%和60%分別喂養(yǎng)CR20%組和CR40%組大鼠。限食實(shí)驗(yàn)開始后的第一個(gè)月內(nèi)兩天記錄一次大鼠體重;第二到第四個(gè)月大鼠生育2

2、窩仔鼠觀察生育力,因其處于妊娠階段,不記錄體重;第五個(gè)月開始到實(shí)驗(yàn)結(jié)束,每個(gè)月稱量大鼠體重兩次監(jiān)測(cè)大鼠體重變化。實(shí)驗(yàn)開始前和實(shí)驗(yàn)開始后第1、5、7、9和11個(gè)月分別做陰道涂片監(jiān)測(cè)動(dòng)情周期。實(shí)驗(yàn)開始前和實(shí)驗(yàn)開始后第1、5、9和12個(gè)月分別取血一次監(jiān)測(cè)血清激素(促性腺激素釋放激素(GnRH)、黃體生成素(LH)和糖皮質(zhì)激素(Cortisone))變化,12個(gè)月后取大鼠卵巢制作組織切片。從卵巢最大切面往兩邊依次選取7張組織切片用于蘇木精-伊紅

3、染色,計(jì)數(shù)每張切片上不同發(fā)育階段卵泡的數(shù)量,計(jì)算7張切片上健康卵泡總數(shù)和各級(jí)卵泡數(shù)量占健康卵泡總數(shù)的百分比。為了進(jìn)一步細(xì)分和全面觀察不同程度CR對(duì)大鼠卵泡發(fā)育和卵巢壽命的影響,我們?cè)诘谝慌笫髮?shí)驗(yàn)開始后又補(bǔ)充了2個(gè)CR組,即CR10%和CR30%。其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與第一批大鼠完全相同。
　　結(jié)果：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中NC組大鼠體重持續(xù)上升,而CR20%組體重小幅增加,CR40%組體重持續(xù)下降。CR20%組、CR40%組卵巢濕重和體重的比值與NC

4、組相比均有所增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。限食1個(gè)月后,連續(xù)生育2窩仔鼠觀察大鼠生育力。與NC組生育的仔鼠數(shù)(9.3±1.2,9.3±1.3)及其體重(6.69±0.54g,6.27±0.24g)相比,CR20%組的仔鼠數(shù)(10.2±1.2,9.2±0.7)相近,第一窩仔鼠體重減輕(5.99±0.44),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但第二窩仔鼠體重相近(6.24±0.16g)。CR40%組只生育了一窩仔鼠,且仔鼠數(shù)(9.3±1.2v

5、s.4.5±3.7)及其體重(6.69±0.54gvs.5.12±0.33g)與NC組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.001)。CR40%組大鼠的健康卵泡數(shù)量(105.7±9.5vs.51.2±5.4)和原始卵泡數(shù)量(55.0±6.8vs.18.3±3.7)均顯著多于NC組(P<0.001,P<0.001),原始卵泡比例(52.1%±2.9%vs.35.8%±5.5%)也顯著大于NC組(P<0.001),而成熟卵泡比例(6

6、.8%±1.9%vs.15.6%±6.2%)和發(fā)育卵泡比例(41.2%±3.0%vs.48.9%±4.2%)則顯著小于NC組(P<0.001,P<0.05),其閉鎖卵泡比例(52.7%±2.9%vs.56.1%±1.8%)與NC組相比有所降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CR20%組卵泡數(shù)量和各級(jí)卵泡比例與NC組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二批大鼠與第一批結(jié)果趨勢(shì)一致,相比NC組,CR10%組和CR30%組的原始卵泡、發(fā)育卵泡、健康卵泡和閉鎖卵泡總

7、數(shù)均增加。與NC組相比,CR30%組健康卵泡比例(48.7%±2.1%vs.43.9%±1.8%)上升且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而閉鎖卵泡比例(51.3%±2.1%vs.56.1%±1.8%)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CR10%組(49.5%±4.9%vs.35.8%±5.5%)和CR30%組(42.3%±6.5%vs.35.8%±5.5%)的原始卵泡比例與NC組相比顯著增加(P<0.001,P<0.05),CR

8、10%組的發(fā)育卵泡比例(46.9%±5.3%vs.48.9%±4.2%)、成熟卵泡比例(3.6%±2.5%vs.15.6%±6.2%)下降,且成熟卵泡與NC組相比顯著下降(P<0.001)。CR30%組的發(fā)育卵泡(46.6±5.1vs.48.9±4.2)、成熟卵泡比例(11.1±1.8vs.15.6±6.2)下降,且成熟卵泡與NC組相比顯著下降(P<0.05)。限食1個(gè)月后,連續(xù)生育2窩仔鼠觀察大鼠生育力。與NC組生育的仔鼠數(shù)(9.3±

9、1.2,9.3±1.3)及其體重(6.69±0.54g,6.27±0.24g)相比,CR10%組的仔鼠數(shù)(7.7±1.3,8.9±1.2)減少,其仔鼠體重(6.03±0.18g,5.91±0.18g)減輕,但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CR30%組的仔鼠數(shù)(6.0±0.7,6.3±0.3)減少、體重(6.44±0.29g,5.62±0.15g)減輕,且仔鼠數(shù)及第二窩仔鼠體重與NC組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.0