復(fù)方扶芳藤合劑口服結(jié)合BMSCs復(fù)合FG移植治療對兔KOA軟骨組織中FNmRNA的表達水平影響.pdf

1、目的:通過采用復(fù)方扶芳藤合劑口服液結(jié)合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)復(fù)合纖維蛋白凝膠(FG)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)移植對造模后證實惠有膝骨性關(guān)節(jié)炎的大白兔進行治療5周后，測定膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨組織中纖維連接蛋白(FN)mRNA的表達水平，以證明對修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的作用，為臨床上尋求一種新型、經(jīng)濟、實用、操作簡單的中西醫(yī)結(jié)合、標(biāo)本兼治的治療KOA的方法，并為下一步研究在臨床上推廣應(yīng)用提供科學(xué)理論依據(jù)。
　　方法:抽取4-6周齡大白兔的骨髓，采用密度梯度

2、離心法與貼壁法相結(jié)合體外分離、培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)至第三代。將43只大白兔采用石膏管型固定兔子右膝關(guān)節(jié)于伸直位6周制作兔KOA模型，處死3只證實造模成功后，將其余40只大白兔解除右膝石膏外固定隨機分為A組（生理鹽水灌胃組），B組（復(fù)方扶芳藤合劑灌胃組），C組（注射BMSCs+FG復(fù)合物組），D組（復(fù)方扶芳藤合劑灌胃+注射BMSCs+FG復(fù)合物組）每組10膝。用1ml注射器配7號針頭進行右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，每周一次，連續(xù)5次。治療5周

3、后取各組兔右膝關(guān)節(jié)軟骨，采用定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法檢測不同治療組之間軟骨組織中FNmRNA的表達水平。
　　結(jié)果:①拆除石膏外固定后，各兔子右膝關(guān)節(jié)呈伸直狀，關(guān)節(jié)僵硬無法屈伸，關(guān)節(jié)比正常稍大。解剖可見關(guān)節(jié)軟骨色澤暗，部分呈米黃色，有龜裂或蟲蝕樣改變，滑膜增厚，關(guān)節(jié)面以內(nèi)側(cè)脛骨平臺、股骨內(nèi)裸改變明顯。②.從骨髓中分離培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)密度梯度離心法并結(jié)合貼壁篩選法培養(yǎng)后貼壁細(xì)胞迅速增多，呈漩渦狀生長，形成小圓梭形樣細(xì)胞外觀，體外

4、培養(yǎng)生長穩(wěn)定，增殖迅速，細(xì)胞形態(tài)與原代細(xì)胞基本相同。③檢測各組兔KOA軟骨組織中纖維連接蛋白(FN)mRNA表達水平，D組（復(fù)方扶芳藤灌胃+注射BMSCs+FG復(fù)合物組）的表達水平為0.369±0.199，較空白組有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)密度梯度離心法并結(jié)合貼壁篩選法培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞取材容易，擴增方法可靠，增殖力強，便于移植。(2) BMSCs和FG復(fù)合材料結(jié)合復(fù)方扶芳藤合劑用于修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨局部缺損方面