復方扶芳藤合劑含藥血清對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響研究.pdf

1、目的：觀察復方扶芳藤合劑含藥血清對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)增殖的影響，并探討其分子機制。
　　方法：1.分別采用密度梯度離心法和全骨髓貼壁法分離4周齡SPF級SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞。檢測骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性：進行形態(tài)學觀察（光鏡）；細胞活性檢測；對第2，3，4，5，6代MSCs應用MTT法測定生長曲線，分析MSCs的生長規(guī)律；細胞的凍存和復蘇。通過誘導使M

2、SCs分化為成骨細胞（von Kossa染色法）；免疫細胞化學染色法檢測細胞層粘連蛋白表達；2.將250g左右SD雄性大鼠隨機分為復方扶芳藤合劑灌胃組和生理鹽水灌胃組，制備血清。用2組血清干預MSCs的生長，MTT法檢測兩組血清對MSCs增殖的影響。RT-PCR法檢測兩組血清對Notch1基因表達的影響；Western blot法檢測兩組血清對NOTCH1蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：1.原代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞接種24小時后開始

3、貼壁生長，形態(tài)為均勻成梭形，并由最初典型的集落生長，逐漸融合成片，呈放射狀或漩渦狀生長，符合MSCs生長的特性。采用全骨髓貼壁法分離的原代MSCs，生長增殖迅速，10-14天MSCs融合接近80％，傳代培養(yǎng)生長良好；而采用密度梯度離心法分離的MSCs，生長增殖較慢，17-20天MSCs融合才接近80%；2. MSCs生長曲線呈S型，由生長曲線分析可知，傳代的MSCs在培養(yǎng)第3-7天為高速生長期，MSCs在第3-6代生長旺盛；3.免疫細胞

4、化學染色顯示所培養(yǎng)的細胞層粘連蛋白表達呈陰性，von Kossa染色后細胞表現(xiàn)為黑色的致密結(jié)節(jié)，證實培養(yǎng)的細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞；4.與生理鹽水對照組相比，復方扶芳藤合劑含藥血清可以明顯促進MSCs的增殖（P<0.05）；5.與生理鹽水對照組相比，復方扶芳藤合劑含藥血清可以明顯促進 Notch1基因的表達（P<0.05）；6.與生理鹽水對照組相比，復方扶芳藤合劑含藥血清可以明顯促進NOTCH1蛋白的表達（P<0.05）。
　　結(jié)論