家蠅胚胎細胞抗菌肽對腫瘤細胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：用脂多糖（LPS）刺激家蠅胚胎細胞產(chǎn)生抗菌肽，提取抗菌肽，研究所提取的抗菌肽對人黑色素瘤細胞（A375）和人髓樣白血病細胞（K562）的抑制作用。 方法：（1）應用含20mg/L脂多糖的無血清M3培養(yǎng)基作用于處于對數(shù)生長期的家蠅胚胎細胞16h，提取上清液中的抗菌肽。（2）將提取的抗菌肽用PBS配制成40、80、160、320、640μg/mL五個濃度組，分別作A375細胞和K562細胞的MTT實驗，對照組采用等量PBS，觀

2、察抗菌肽對兩種腫瘤細胞的抑制作用。同時以人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞作為正常對照組。（3）用MTT法對上述五種濃度作A375細胞和K562細胞的生長曲線，正常組采用等量培養(yǎng)基。（4）用Annexin V—Fitc凋亡檢測試劑盒測定五種濃度的抗菌肽是否引起A375細胞和K562細胞的早期凋亡及其隨濃度變化時凋亡率的變化，正常對照組采用等量PBS和培養(yǎng)基。（5）流式細胞儀檢測五種濃度抗菌肽對A375細胞和K562細胞細胞周期及凋亡的影響，正常對照組

3、采用等量PBS和培養(yǎng)基。（6）流式細胞儀測定高三尖杉酯堿和家蠅胚胎細胞抗菌肽對K562細胞和人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的有效殺傷率。 結(jié)果：（1）抑菌實驗顯示家蠅胚胎細胞抗菌肽對大腸桿菌有抑菌活性。（2）MTT法檢測顯示五種濃度抗菌肽對A375細胞和K562細胞均具有抑制作用，與正常對照組相比，差異有顯著性（P<0.05）。五種濃度抗菌肽對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞均無抑制作用，與正常對照組相比，差異無顯著性（P>0.05）。（3）在不同濃

4、度抗菌肽作用下，K562細胞和A375細胞的生長受到明顯的抑制，藥物濃度越高、作用時間越長，對細胞的抑制作用越強。（4）各濃度組抗菌肽對A375細胞和K562細胞的早期凋亡率無顯著性差異（P>0.05）。（5）抗菌肽引起A375細胞的G2/M期升高，高濃度組（>160μg/mL）可引起G0/G1期降低，PI明顯升高。對K562細胞S期的影響與正常對照組相比差異有顯著性（P<0.05）。各濃度組均可引起K562細胞的G0/G1期升高，細胞

5、增殖指數(shù)PI降低。與正常對照組相比，各濃度組引起的A375細胞和K562細胞細胞凋亡率差異無顯著性（P>0.05）。（6）對照組、高三尖杉酯堿組及家蠅胚胎細胞抗菌肽組對K562細胞的有效殺傷率分別為27.30%、80.48%和83.33%；對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的有效殺傷率分別為44.00%、84.78%和36.37%。 結(jié)論：（1）家蠅胚胎細胞抗菌肽對大腸桿菌具有抑菌活性。（2）家蠅胚胎細胞抗菌肽對人黑色素瘤細胞A375和人髓