P物質(zhì)及其受體NK-1在乳腺癌中的表達(dá)及作用.pdf

1、已有研究證實(shí)在乳腺癌組織及某些乳腺癌細(xì)胞系中存在PPT-A和神經(jīng)激肽1(neurokinin-1，NK-1) mRNA的擴(kuò)增，但目前對(duì)于P物質(zhì)(substanceP，SP)及NK-1在乳腺癌組織及人乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)及細(xì)胞學(xué)定位尚不清楚，亦未見(jiàn)有關(guān)NK-1特異性激動(dòng)劑[Sar9，Met(02)11]substance P(SMSP)和NK-1特異性拮抗劑SR140333對(duì)乳腺癌生長(zhǎng)增殖的影響作用的研究報(bào)道。目的1.研究P物質(zhì)及其受體N

2、K-1在乳腺癌組織及T47D細(xì)胞系中的表達(dá)特點(diǎn)；2.研究SMSP以及SR140333對(duì)體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞系T47D生長(zhǎng)增殖的影響；3.探討P物質(zhì)和NK-1在乳腺癌的發(fā)生及生長(zhǎng)增殖過(guò)程中的作用。方法采用免疫組織化學(xué)染色研究P物質(zhì)和NK-1在乳腺癌組織的表達(dá)及臨床病理特點(diǎn)；同時(shí)采用免疫組化染色檢測(cè)二者在乳腺癌癌旁組織以及非典型增生（n=5）、導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤（n=3）、腺病(n=6)和纖維腺瘤(n=5)等病變組織中的表達(dá)情況：采用免疫細(xì)胞

3、化學(xué)染色了解二者在體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞系T47D中的表達(dá)特點(diǎn)；采用MTT比色法檢測(cè)不同濃度的SMSP和SR140333單獨(dú)和共同作用后T47D細(xì)胞活性的變化；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SR140333作用后T47D細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位的變化；采用Hoechst33258熒光染色及HE染色觀察SR140333作用后細(xì)胞的凋亡情況以及形態(tài)學(xué)變化；采用MTT比色法及細(xì)胞計(jì)數(shù)法比較SMSP和SR140333單獨(dú)作用后T47D細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。結(jié)果在乳腺癌組

4、織以及T47D細(xì)胞系中P物質(zhì)和NK-1均呈陽(yáng)性表達(dá)；P物質(zhì)剛性顆粒位于腫瘤細(xì)胞胞漿，而NK-1主要位于腫瘤細(xì)胞胞膜，也可存在于細(xì)胞漿；二者在乳腺癌組織中表達(dá)水平同乳腺癌的分化程度相關(guān)；在乳腺癌組織及癌旁組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞中NK-1呈剛性表達(dá)，而在良性病變組織中的血管卻為陰性；乳腺導(dǎo)管上皮非典型增生中P物質(zhì)和NK-1呈弱剛性表達(dá)，而在腺病變和纖維腺瘤中均為陰性；3例導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤中，2例NK-1呈弱陽(yáng)性；SMSP的濃度從10-10 M到1

5、0-7M時(shí)它可以促進(jìn)T47D細(xì)胞系的生長(zhǎng)增殖，濃度為10-8M時(shí)其促增殖作用最明顯，而到達(dá)10-6M時(shí)反而抑制T47D細(xì)胞系的增殖；SR140333從10-9M到10-5M時(shí)能夠減緩并抑制T47D細(xì)胞系的增殖，并且這種影響作用呈劑量依賴(lài)性；HE染色及Hoechst33258熒光染色證明SR140333作用后可以引起T47D細(xì)胞系增殖減緩并發(fā)生凋亡，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定證明線(xiàn)粒體誘導(dǎo)途徑參與了T47D細(xì)胞的凋亡過(guò)程；兩種試劑單獨(dú)作用后第3天起，

6、SMSP可以明顯加快T47D細(xì)胞的生長(zhǎng)而SR140333從第4天起可以減緩其生長(zhǎng)：SMSP同SR140333合用時(shí)，10-6M的SR140333能夠抑制10-8M的SMSP引起的細(xì)胞增殖作用。結(jié)論該研究提示神經(jīng)內(nèi)分泌因素參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，并為乳腺癌的診斷及鑒別診斷提供了新的免疫組化指標(biāo)。此外，本研究還證實(shí)了SR140333可以通過(guò)阻斷NK-1在體外培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞系中可以發(fā)揮生長(zhǎng)抑制作用，這提示NK-1可以做為乳腺癌新的治療靶