ATRA協(xié)同BCNU靶向抑制人腦腫瘤干細胞的實驗研究.pdf

1、中南大學博士學位論文ATRA協(xié)同BCNU靶向抑制人腦腫瘤干細胞的實驗研究姓名：羅湘穎申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（神經外科學）指導教師：方加勝20070501博士論文中文摘要用免疫磁珠法分離CDl33陽性和陰性細胞以純化BTSC以及用CDl33陽性和陰性細胞分別腦內移植接種BALB／cnu裸鼠致瘤實驗驗證BTSC的致瘤能力；通過BTSC在含血清培養(yǎng)基中貼壁分化后，再次轉入無血清培養(yǎng)條件下的去分化觀察BTSC的去分化特性。第二章主要通過

2、單克隆形成實驗和MTT實驗觀察ATRA協(xié)同BCNU在體外抑帶t]BTSC的增殖：利用AO／EB雙熒光染色法定性觀察ATRA協(xié)同BCNU體外抑制BTSC過程中的凋亡現象并利用流式細胞術定量測定了凋亡比例；通過半定量RTPCR實驗研究ATRA協(xié)同BCNU促BTSC凋亡的分子機制，在上述實驗中均設置對照組并做統(tǒng)計學分析。3結果第一章結果表明，利用本研究使用的培養(yǎng)方法可以從本組全部34例較高級別星型細胞膠質瘤病例中分離培養(yǎng)出BTSC；BTSC具

3、有無限擴增和自我更新能力，表達CDl33和Nestin；在撤除生長因子并添加胎牛血清的培養(yǎng)環(huán)境中BTSC發(fā)生貼壁分化，分化腫瘤細胞可以具有神經元(NeuN)、星形膠質細胞(GFAP)、少突膠質細胞(CNPase)的表型，R口BTSC具有多向分化能力；利用免疫磁珠細胞分離技術可以獲得純度很高的、具有體外增殖和體內致瘤能力的BTSC，可以在裸鼠腦內導致腫瘤發(fā)生；BTSC在含血清培養(yǎng)基中貼壁分化后，再次轉入無血清培養(yǎng)條件下具有去分化特性。第二

4、章結果表明，ATRA協(xié)同BCNU在體外較單獨應用BCNU更能抑制BTSC的增殖，削弱BTSC的自我更新能力；在ATRA協(xié)同BCNU體外抑制BTSC過程中有凋亡現象，凋亡比例比單獨應用BCNU有顯著提高；通過半定量RTPCR實驗證實ATRA協(xié)同BCNU促BTSC凋亡的分子機制之一為Survivin基因的下調。4結論膠質瘤的腫瘤組織中存在具有無限擴增能力的BTSC；可以利用添加EGF和bFGF的無血清培養(yǎng)基和懸浮細胞培養(yǎng)方法成功分離培養(yǎng)BT

5、SC；BTSC可以在這種體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖形成單克隆性腦腫瘤干細胞球；BTSC可以分化產生具有多種成熟神經細胞表型的分化腫瘤細胞；可以初步確定CDl33為BTSC的特異性標志物；BTSC可以在裸鼠腦內導致腫瘤發(fā)生；BTSC具有去分化特性。ATRA協(xié)同BCNU在體外較單獨應用BCNU更能抑St]BTSC的增殖以及削弱BTSC的自我更新能力；在ATRA協(xié)同BCNU體外抑St]BTSC過程中存在凋亡，凋亡比例比單獨應用BCNU有顯著提高，其分