靶向VEGF的siRNA協(xié)同5-FU抑制人乳腺癌細胞的實驗研究.pdf

1、目的:探討慢病毒介導靶向VEGF小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對人乳腺癌細胞MCF-7增殖、凋亡和凋亡通路中基因表達的影響，以及聯(lián)合應用抗癌藥5-氟尿嘧啶的協(xié)同作用。
　　 方法:以攜帶VEGF siRNA序列的慢病毒重組載體感染正常的MCF-7細胞，經反復實驗優(yōu)化，確定感染條件;將人乳腺癌細胞MCF-7分為五組:正常對照組不作特殊處理，陰性對照組感染NC-Lv陰性病毒，慢病毒RNA干擾組

2、感染VEGF-RNAi-Lv慢病毒，5-FU組用5-FU處理MCF-7細胞，慢病毒VEGF-RNAi-Lv+5-FU組用5-FU處理VEGF-RNAi-Lv慢病毒感染的MCF-7細胞;提取細胞的總RNA和蛋白，利用RT-PCR法檢測VEGF、p21及bc卜2mRNA的表達，Western blot檢測VEGF、SIRT1、p53、p21、bcl-2、survivin蛋白的表達;利用細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒（CCK-8）和流式細胞術檢

3、測RNAi及協(xié)同5-FU對細胞增殖及凋亡的影響。
　　 結果:慢病毒對MCF-7細胞的感染率達90％以上;與正常對照組相比，RT-PCR檢測顯示慢病毒VEGF-RNAi-Lv干擾組細胞VEGF、bcl-2的mRNA表達水平明顯下調（P＜0.05)，p21 mRNA表達水平明顯上調（P＜0.05），Western blot顯示慢病毒VEGF-siRNA-Lv干擾組細胞VEGF、SIRT1、bcl-2、survivin的蛋白表達水平

4、明顯下調（P＜0.05)，p53、p21蛋白表達水平明顯上調（P＜0.05），而陰性對照組均無明顯變化（P＞0.05）;與正常對照組及陰性對照組相比，CCK-8及流式細胞術檢測顯示慢病毒VEGF-RNAi-Lv干擾組、5-FU組及慢病毒VEGF-RNAi-Lv+5-FU組的細胞生長緩慢，增殖明顯受到抑制，細胞的增殖抑制率及凋亡率顯著提高(P＜0.05)，聯(lián)合治療組的協(xié)同作用更為明顯(P＜0.05)。
　　 結論:慢病毒介導的RN