抗人ADAM15抗體抑制腫瘤增殖及腫瘤靶向?qū)嶒炑芯?pdf

1、目的：
　　 去整合素-金屬蛋白酶15(ADAM15，A Disintegrin And Metalloproteinase 15)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤密切相關(guān)的跨膜糖蛋白，本研究探討抗人ADAM15抗體與腫瘤細胞的結(jié)合和抑制其增殖的生物學特性，初步研究其體內(nèi)靶向定位能力。為應(yīng)用抗人ADAM15抗體進行惡性腫瘤診斷和治療提供新方法。
　　 方法：
　　 (1)用Protein G免疫親和層析法純化抗人ADAM

2、15多克隆抗體(anti-ADAM15抗體，由江南大學提供)；
　　 (2)用間接ELISA法檢測在孵育時間為2、24、48h和抗體濃度為0、2、4、8μg/ml的條件下該抗體與胃癌細胞株HGC-27、肺癌細胞株A549以及微血管內(nèi)皮細胞株HMEC-1的結(jié)合情況；
　　 (3)用MTT法測定該抗體在抗體濃度為4μg/ml而孵育時間分別為48、72、96h的條件下對上述腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞增殖的抑制率；
　　 (

3、4)建立胃癌細胞株HGC-27荷瘤裸鼠模型，用碘-125標記anti-ADAM15抗體并由尾靜脈注射到荷瘤裸鼠體內(nèi)進行放射免疫顯像，評價該抗體在體內(nèi)對腫瘤的靶向定位能力。
　　 結(jié)果：
　　 1．抗體濃度為2～8μg/ml的條件下，anti-ADAM15抗體與三種細胞株結(jié)合的OD450nm均高于對照組，其結(jié)合程度隨抗體濃度的增高而增強；孵育時間為24h或48h的結(jié)合程度明顯強于2h。
　　 2．①該抗體在濃度為4

4、μg/ml時對三種細胞株的增殖都有一定的抑制作用：當細胞培養(yǎng)時間為48和72h時，三種細胞株增殖測定OD490nm實驗組與對照組相比均有明顯下降；當培養(yǎng)時間為96h時，血管內(nèi)皮細胞株HMEC-1OD490nm實驗組與對照組相比明顯下降。
　　 ②當培養(yǎng)時間為48h時，anti-ADAM15抗體對胃癌HGC-27細胞及血管內(nèi)皮HMEC-1細胞增殖抑制率高于肺癌A549細胞，抑制率分別為(25.74±5.93)％、(23.32±3.

5、70)%、（13.68±4.33）%，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 ③該抗體對胃癌HGC-27細胞及血管內(nèi)皮HMEC-1細胞的增殖抑制率在培養(yǎng)時間為72h時低于48h，抑制率分別為(14.11±6.25)%和（17.81±4.11）%，差異具有統(tǒng)計學意義(HGC-27細胞組P＜O.O1，HMEC-1細胞組P＜0.05)。
　　 3.125I-anti-ADAM15抗體標記率為(75.16±9.43)%，

6、純化后放射化學純度可達(99.44±0.21)%。125I-anti-ADAM15抗體經(jīng)尾靜脈注入荷瘤鼠后，隨時間延長T/NT逐漸增高，在48h腫瘤清晰顯影，T/NT可達3.84±0.43。
　　 結(jié)論：
　　 Anti-ADAM15抗體與胃癌細胞、肺癌細胞以及微血管內(nèi)皮細胞均能有效結(jié)合，并且對肺癌細胞、胃癌細胞及血管內(nèi)皮細胞的增殖有一定的抑制作用，125I-anti-ADAM15抗體在荷胃癌裸鼠體內(nèi)具有腫瘤靶向定位能力