TSHβ剪切體在碘過(guò)量和甲狀腺球蛋白引發(fā)NOD鼠自身免疫性甲狀腺炎的表達(dá).pdf

1、目的:
　　 已知除了垂體，免疫系統(tǒng)也能產(chǎn)生TSH。最近科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一種骨髓造血細(xì)胞可以表達(dá)TSHβ剪切體并可遷移到甲狀腺組織表達(dá)該物質(zhì)。TSHβ剪切體在垂體、骨髓和甲狀腺都有表達(dá)，但脾作為機(jī)體重要的免疫器官，是否表達(dá)這一剪切體尚未證實(shí)，且該剪切體的病理生理學(xué)意義尚且不清。因此我們要確認(rèn)脾組織是否表達(dá)TSHβ剪切體；通過(guò)檢測(cè)TSHβ剪切體在碘過(guò)量和甲狀腺球蛋白誘發(fā)的自身免疫性甲狀腺炎中小鼠不同器官表達(dá)的變化，探討發(fā)生甲狀腺炎時(shí)，T

2、SHβ剪切體對(duì)甲狀腺功能發(fā)揮的作用，初步了解TSHβ剪切體與甲狀腺炎發(fā)病的關(guān)系。以便更深入研究TSHβ剪切體在下丘腦-垂體-甲狀腺軸以及在免疫-內(nèi)分泌相互作用的中的具體作用和機(jī)制。
　　 方法:
　　 本實(shí)驗(yàn)首先選擇20只雌性自身免疫性疾病易感的NOD小鼠，7-8周齡，隨機(jī)分為4組，每組5只。分別為：對(duì)照組（C）：飲用去離子水；碘過(guò)量組（HI）：飲用0.05％NaI水；TG組（TG）：飲用去離子水，8周齡時(shí)給予每只鼠0.

3、1mgTG皮下免疫，11周齡、15周齡加強(qiáng)免疫兩次；碘過(guò)量+TG組（HI+TG）：飲0.05％NaI水，TG免疫同上。取動(dòng)物全血，采用RIA法和ELISA法分別檢測(cè)小鼠血清中甲狀腺激素和促甲狀腺素水平。
　　 然后對(duì)垂體和脾組織進(jìn)行TSHβ免疫熒光染色，觀察。TSHβ陽(yáng)性細(xì)胞在脾的分布。使用PCR技術(shù)對(duì)TSHβ剪切體在NOD小鼠垂體、骨髓、脾與甲狀腺組織中表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)脾組織該基因的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。用SYBR GREEN實(shí)

4、時(shí)熒光定量PCR法分析不同處理因素下TSHβ剪切體基因mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 TG組與C組比較血清T4水平和TSH水平都增加。C組T4水平為（36.43±3.87）nmol/L，TSH水平為（5.55±0.28）ng/mL。TG組血清T4水平為（69.70±16.45）nmol/L（P<0.05）和TSH水平為（8.44±0.71）ng/mL（P<0.01）。HI組和HI+TG組TT4水平較C組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，

5、而TSH水平較C組升高，分別為（6.98±0.27）ng/mL（P<0.05）和（9.12±0.36）ng/mL（P<0.01）。
　　 脾組織TSHβ陽(yáng)性細(xì)胞主要位于邊緣區(qū)，生發(fā)中心有少量陽(yáng)性細(xì)胞，但不能確認(rèn)是天然型TSHβ還是TSHβ剪接體；垂體可見(jiàn)大量TSHβ陽(yáng)性細(xì)胞。
　　 RT-PCR技術(shù)顯示骨髓、垂體、甲狀腺和脾都表達(dá)TSHβ剪接體，但是除垂體外其他組織都不表達(dá)自然型TSHβ。
　　 TG組骨髓TSH

6、β剪接體表達(dá)（0.026±0.010）較C組（0.014±0.007）增加（P<0.05），垂體和甲狀腺TSHβ剪接體表達(dá)與C組比無(wú)明顯差異，垂體自然型TSHβ表達(dá)與C組比也無(wú)明顯差異。
　　 HI組骨髓TSHβ剪接體表達(dá)與C組比較無(wú)差異； HI組垂體TSHβ剪接體表達(dá)與C組比較明顯增加（P<0.01），HI組為（0.038±0.010），C組為（0.015±0.007）；HI組甲狀腺TSHβ剪切體表達(dá)較C組增加（P<0.05）

7、，HI組為（0.036±0.007），C組為（0.017±0.003）：垂體自然型TSHβ表達(dá)（0.013±0.003）與C組（0.006±0.000）比增加（P<0.01）。
　　 HI+TG組只有垂體自然型TSHβ（0.015±0.004）與C組比較，表達(dá)有增加（P<0.01）。
　　 各處理組脾組織TSHβ剪切體表達(dá)未做出結(jié)果。
　　 結(jié)論:
　　 NOD小鼠脾臟作為機(jī)體重要的免疫器官也可以表達(dá)TS

8、Hβ剪切體。TG免疫可使血中TSH水平升高，與源于骨髓細(xì)胞分泌的TSHβ剪切體表達(dá)有關(guān)，骨髓TSHβ剪切體的表達(dá)可能不受血中T4的負(fù)反饋調(diào)節(jié)；碘過(guò)量使T4水平下降，垂體中天然型TSHβmRNA的表達(dá)升高，其變化符合HPT軸的反饋學(xué)說(shuō)，而垂體TSHβ剪切體表達(dá)的調(diào)控還有待于進(jìn)一步研究驗(yàn)證；碘過(guò)量組與TG免疫組甲狀腺TSHβ剪切體表達(dá)不一致，提示與碘過(guò)量誘發(fā)的EAT是以細(xì)胞免疫為主的炎癥，所造成的炎癥反應(yīng)和組織破壞程度較TG免疫更為嚴(yán)重，導(dǎo)