RNAi沉默TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文對RNAi沉默TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞功能影響進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。本文分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分體外培養(yǎng)正常和瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGF-β/Smads信號表達(dá)的差異。
　　 目的：探討體外培養(yǎng)正常及瘢痕疙瘩中成纖維細(xì)胞TGF-β/Smads信號表達(dá)的差異。
　　 方法：采用組織塊細(xì)胞培養(yǎng)法，培養(yǎng)正常及瘢痕組織成纖維細(xì)胞，用RT-PCR方法檢測細(xì)胞中TIEG、Smad2、Smad7以及α-SMA、colla

2、genⅠ mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示：(1)正常皮膚成纖維細(xì)胞的TIEG mRNA表達(dá)水平較低，而在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中，則有較高水平的TIEGmRNA的表達(dá)(P＜0.05)；(2)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞與正常皮膚成纖維細(xì)胞比較，瘢痕疙瘩中表達(dá)Smad2 mRNA增強(qiáng)(P＜0.05)，表達(dá)Smad7mRNA減弱(P＜0.05)；(3)瘢痕疙瘩比正常皮膚成纖維細(xì)胞α-SMAmRNA和CollagenⅠ mRN

3、A的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：瘢痕疙瘩中的成纖維細(xì)胞表達(dá)TIEG增高，并活化TGF-β/Smad信號通路，下調(diào)內(nèi)源性Smad7并上調(diào)Smad2基因轉(zhuǎn)錄，并可促進(jìn)成纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和細(xì)胞外基質(zhì)合成。
　　 第二部分 pSUPER.gfp/TIEG干擾質(zhì)粒對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGF-β/Smads的影響。
　　 目的：探討TIEGsiRNA表達(dá)載體pSUPER.gfp/TIEG對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGF

4、-β/Smads信號通路基因表達(dá)的影響。
　　 方法：采用小分子RNA干擾(RNAi)技術(shù)，用脂質(zhì)體將pSUPER.gfp/TIEG轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測阻礙內(nèi)源性TGF-β/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的條件下瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TIEG、Smad2、Smad7以及α-SMA、collagenⅠ mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：pSUPER.gfp/TIEG可有效干擾瘢