5-氟尿嘧啶對體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖和凋亡的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討5-氟尿嘧啶對體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖和凋亡方面的生物學影響。 方法:①成纖維細胞體外原代培養(yǎng):手術取6例瘢痕疙瘩(Keloid,K)(耳垂、大腿各1例、胸前、上臂各2例),均為安徽醫(yī)科大學附屬醫(yī)院整形外科手術病例,按文獻方法進行成纖維細胞原代培養(yǎng),待細胞融合后傳代,實驗所用細胞均為處于4~8代對數(shù)生長期的瘢痕疙瘩成纖維細胞(Keloid fibroblast,KF);②將不同濃度5-氟尿嘧啶(5-fluoro

2、uracil,5-FU)(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6g/L)對4~8代瘢痕疙瘩成纖維細胞分別進行干預24h,48h,72h,采用四甲基偶氮唑鹽比色法檢測各濃度藥物對成纖維細胞的抑制率,計算5-氟尿嘧啶對瘢痕疙瘩成纖維細胞的半數(shù)抑制濃度(50%Inhibifiory concentration,IC50)值。再選用不超過IC50的5個濃度:0.2,0.3,0.4,0.5,0.6 g/L,作為余下實驗濃度;③應用流式細胞術(Fl

3、ow cytometry,F(xiàn)CM)分析法觀察5-氟尿嘧啶干預后KF的細胞周期變化及細胞凋亡百分率;④應用Hoechst33258熒光染色法觀察凋亡成纖維細胞的形態(tài)學特征;⑤應用蛋白免疫印跡技術(Western-blot)檢測5-氟尿嘧啶對瘢痕疙瘩成纖維細胞Bcl-2、Bax蛋白表達的影響。 結果:6例瘢痕疙瘩標本原代培養(yǎng)成纖維細胞成活良好,均用于實驗,進入結果分析。①0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g/L 5-氟尿嘧啶分

4、別干預24h,48h,72h后,各組間KF細胞抑制率兩兩比較差異均有顯著性(P<0.01)。并采用作圖法求得三組不同干預時間下的半數(shù)抑制濃度IC50分別為(0.816±0.041)g/L, (0.637±0.028)g/L, (0.430±0.032)g/L;②0.2,0.3,0.4,0.5,0.6 g/L 5-氟尿嘧啶干預48 h后,KF細胞凋亡率組間兩兩比較有差異(P<0.05),與對照組比較,差異有顯著性意義(P<0.01);

5、 實驗組與對照組細胞周期百分數(shù)比較,表現(xiàn)為G0/G1期停滯,S期減少,各組間兩兩比較有差異(P<0.05);③各濃度5.氟尿嘧啶干預48 h后,Hoechst 33258熒光染色觀察KF均有不同程度核濃縮,表明KF發(fā)生了不同程度的凋亡;④經(jīng)不同濃度5-氟尿嘧啶干預KF 48 h后,實驗組Bcl-2蛋白表達均低于對照組(P<0.05),實驗組Bax蛋白表達均高于對照組(P<0.05)。 結論:本實驗進一步揭示了5-氟尿嘧啶治療

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