阿膠低肽及其制劑的研究.pdf

1、本文采用生物酶解法得到阿膠的藥效物質(zhì)。以藥效學(xué)為指標(biāo),確定了口服用及注射用阿膠低肽的有效分子量及安全分子量范圍,并考察了其量效關(guān)系;以低肽含量為指標(biāo),進(jìn)行了單因素考察,在此基礎(chǔ)之上,以正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選了阿膠酶解工藝;以膜分離技術(shù)對酶解液進(jìn)行了純化,考察損失率以優(yōu)化其精制工藝,并制成了口服用及注射用阿膠低肽凍干粉;以Sephadex、HPCE、HPLC等各種技術(shù),對阿膠低肽凍干粉溶液進(jìn)一步分離后,分別以SDS-PAGE、細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行譜效

2、關(guān)系的研究、以HPLC-MS法對其有效峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究;最后對制劑進(jìn)行了安全性檢查、藥效學(xué)研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。
　　以致敏活性為指標(biāo),通過實(shí)驗(yàn)確定了口服用低肽有效分子量范圍為＜5kD,注射用低肽安全及有效分子量范圍為1kD-3kD。＜5kD分子量范圍的阿膠低肽,其劑量與藥效在5mg·kg1-15mg-kg-1范圍內(nèi)呈正相關(guān),1kD-3kD分子量范圍的阿膠低肽,其劑量與藥效在1mg·kgl-20mg·kg-1范圍內(nèi)呈正相關(guān)。阿膠低肽優(yōu)

3、選制備工藝為:口服用低肽的酶解工藝:酶解溫度為42℃、胃蛋白酶酶解pH為2.0、胃蛋白酶酶量10萬U·g-1、胃蛋白酶酶解時(shí)間為1.5小時(shí)、胰蛋白酶酶解pH為8.0、胰蛋白酶酶量為5千U·g-1、胰蛋白酶酶解時(shí)間為2.5小時(shí);注射用阿膠低肽的酶解工藝:酶解溫度為42℃、胃蛋白酶酶解pH為2.0、胃蛋白酶酶量10萬U·g-1、胃蛋白酶酶解時(shí)間為2小時(shí)、胰蛋白酶酶解pH為8.0、胰蛋白酶酶量為5千U·g-1、胰蛋白酶酶解時(shí)間為3小時(shí);超濾工

4、藝:取50g阿膠粉制成阿膠低肽酶解液,稀釋至1000mL,水浴預(yù)熱至40℃,在柱壓0.15±0.01MPa下分別經(jīng)過截留分子量30kD、5kD(口服用)、3kD(注射用)的超濾膜超濾,并水洗一次?？诜冒⒛z低肽無異常毒性,為實(shí)際無毒物質(zhì);注射用阿膠低肽無明顯致敏性,無毒副作用,無熱原反應(yīng)。
　　采用4種常見貧血模型(相當(dāng)于臨床上常見的長期中毒性、失血性、化療性、放療性貧血);證實(shí)阿膠低肽對不同類型的貧血具有不同程度的改善作用;小鼠

5、負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)和血清尿素氮及肝糖原測定表明,阿膠低肽具有一定的抗疲勞作用趨勢;小鼠免疫增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)表明,阿膠低肽可提高小鼠循環(huán)抗體血清溶血素水平、增強(qiáng)DNCB誘導(dǎo)小鼠DTH反應(yīng),從而對機(jī)體體液免疫、細(xì)胞免疫發(fā)揮作用;此外,對非特異性免疫巨噬系統(tǒng)也有一定的促進(jìn)作用。通過澄清度、pH、密度及純度檢測可以檢驗(yàn)口服用阿膠低肽的質(zhì)量。通過檢查可見異物、不溶性顆粒、pH、分子量范圍、純度(或低肽含量)及升血效價(jià)可以檢驗(yàn)注射用阿膠低肽的質(zhì)量。通過對阿膠低肽

6、及其幾個(gè)組分的Tricine-SDS-PAGE研究,確定了阿膠低肽成品制劑的分子量在2kD以下,可作為阿膠低肽定性鑒別的方法。
　　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明,存儲(chǔ)于西林瓶中的注射用阿膠低肽凍干粉可于4℃下存儲(chǔ)2年。在完成阿膠低肽制劑的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究了其成分及結(jié)構(gòu)。首先用分子篩將阿膠低肽分成3個(gè)組分;然后將幾個(gè)組分進(jìn)一步純化后進(jìn)行了細(xì)胞培養(yǎng),同時(shí)研究了其中肽含量較多的2號及3號峰的HPLC分析方法;從而得出2號峰是有效組分的結(jié)論;最后將2