酪氨酸酶七肽抑制劑的篩選及其柔性脂質體的制備.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩78頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、酪氨酸酶(EC1.14.18.1)又稱多酚氧化酶,是一種含銅金屬酶,廣泛存在于微生物,昆蟲,植物及哺乳動物中,不同來源的酪氨酸酶具有相似的結構和性質。酪氨酸酶是生物體合成黑色素的關鍵酶。因此,研究能抑制酪氨酸酶活性的物質成為治療色素沉著性疾病的重要手段。酪氨酸酶抑制劑還可以應用于美白化妝品,生物殺蟲劑,果蔬保鮮等眾多領域。目前,對酪氨酸酶抑制劑的研究已成為熱點研究領域之一。
   本論文從展示在噬菌體表面的隨機肽庫中篩選出了一種

2、酪氨酸酶抑制劑,對其進行了抑制動力學研究,探討了抑制機理。制備了合適的載藥體系對該抑制劑進行了包裹,研究了其透皮性能。
   論文主要內容包括:
   利用噬菌體表面展示技術,以酪氨酸酶分子為靶分子,經(jīng)過三輪生物淘洗過程,獲得了10個對酪氨酸酶有特異性親和力的單克隆。對單克隆進行擴增和滴度測試后,通過ELISA測試,測定親和力最高的為3號克隆。擴增該單克隆提取質粒后進行測序,編碼基因作為病毒基因組中的一部分通過分泌型噬菌

3、體的單鏈DNA測序推導出來。該單克隆的序列為:Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe(7AAP)。即展示在噬菌體顆粒表面,與酪氨酸酶分子親和性最強的是該序列的七肽。
   采用酶動力學方法,分別以L-酪氨酸和L-多巴為底物,驗證了7AAP對于酪氨酸酶活性的抑制作用。結果顯示7AAP對酪氨酸酶具有明顯的抑制作用,可抑制酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活力。對酪氨酸酶單酚酶的抑制效應主要表現(xiàn)于酶催化反應的延滯時間有明顯的延長,

4、Lineweaver-Burk圖顯示7AAP對二酚酶的抑制作用表現(xiàn)為可逆競爭性抑制。
   以人A375黑色素瘤細胞為受試細胞,設置不同的7AAP濃度(0,4.5,9.0,18.0,36.0,72.0,144.0,288.0,576.0,1152.0μmol/L),探討7AAP對A375黑色素瘤細胞的形態(tài),增殖活性,黑素合成以及酪氨酸酶活性的影響。顯微鏡下觀察,與對照組相比,7AAP對A375黑色素瘤細胞的形態(tài)無影響,濃度低于7

5、2μmol/L時,對人A375黑色素瘤細胞增殖無明顯影響。在4.5-72μmol/L濃度范圍內,呈濃度依賴性抑制黑色素瘤細胞黑素生成。為探討這種黑素生成抑制作用是否與酪氨酸酶有關,進一步檢測了7AAP對黑素細胞酪氨酸酶活性的影響,結果顯示,與黑素生成抑制作用相似,在4.5.72μmol/L濃度范圍內,7AAP呈濃度依賴性抑制酪氨酸酶活性。結果表明在4.5-72μmol/L,濃度范圍內,7AAP具有抑制黑素細胞合成和酪氨酸酶活性的功能,而

6、不是依靠降低細胞增殖率而減少相對黑素的含量。
   對7AAP應用于經(jīng)皮給藥系統(tǒng)進行了初步探索,以大豆卵磷脂,膽固醇為原料,采用逆相蒸發(fā)法、薄膜分散法、薄膜超聲法三種方法制備了載7AAP納米脂質體。對其進行了粒徑,Zeta電位,回收率,包封率的測定等表征。動態(tài)光散射的結果顯示,由逆向蒸發(fā)法制備的脂質體粒徑分布最均勻,范圍較窄。場發(fā)射掃描電鏡下觀察,脂質體呈白色球狀或橢球狀,絕大部分為單室脂質體。采用逆向蒸發(fā)法,分別以磷脂:膽酸鈉

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論