副豬嗜血桿菌病重組亞單位疫苗候選抗原蛋白的免疫保護效力評價.pdf

1、副豬嗜血桿菌（H. parasuis）定殖于豬上呼吸道，為一種條件致病菌，急性感染可導致全身性疾病，感染后主要的病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎、肺炎、漿膜炎和腦膜炎。對我國乃至全世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，是目前危害全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴重的細菌病之一。
　　按照瓊脂擴散試驗和間接血凝試驗（IHA）對H. parasuis進行血清分型，H. parasuis至少可分為15個血清型，但約20％的分離株無法分型。目前，市場上還沒有一種疫苗對所有血清型的

2、H. parasuis感染都能產(chǎn)生有效的免疫保護作用。H. parasuis的一些分泌蛋白和外膜蛋白被認為是有效的保護性抗原，有作為有效疫苗的候選抗原的潛力。最近，本實驗室通過蛋白質(zhì)組學技術(shù)從H. parasuis血清5型參考菌株Nagasaki中篩選到7個分泌蛋白（CdtB, CdtC, AfuA, HbpA, OppA, HktE, HPS-04307），為了評價上述7個蛋白用于制備重組亞單位疫苗的潛力，本研究將 cdtB和cdtC

3、基因進行了克?。?個蛋白的重組載體已由本實驗室構(gòu)建完成），并以His融合蛋白的形式進行了表達和純化。初期以各蛋白對小鼠進行免疫攻毒試驗，從中篩選到5個保護作用較好的重組蛋白（rCdtB, rCdtC, rAfuA, rOppA, rHPS-04307），并再次以小鼠模型評價了這5個蛋白混合后的免疫保護效力。在小鼠模型中，所有蛋白都能誘導機體產(chǎn)生體液免疫反應并對血清5型HN10菌株和13型ZD12菌株的H. parasuis攻毒產(chǎn)生不同

4、程度的免疫保護作用，5個蛋白混合后對小鼠的保護率最高（對H. parasuis血清5型HN10和13型ZD12菌株的免疫保護率分別為85%和60%）。此外，全血殺菌實驗結(jié)果表明各蛋白的抗血清能夠有效地抑制 H. parasuis的生長，淋巴細胞增殖試驗結(jié)果表明各蛋白能夠顯著刺激小鼠 T淋巴細胞增殖。本研究表明 rCdtB, rCdtC, rAfuA, rOppA, rHPS-04307能夠?qū)χ滤绖┝康腍. parasuis血清5型HN1