神經(jīng)母細(xì)胞瘤VEGF表達(dá)的臨床意義及Bevacizumab體外抗腫瘤作用的研究.pdf

1、神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童最常見(jiàn)的惡性實(shí)體瘤之一，惡性程度高，進(jìn)展快，大部分患者診斷時(shí)已是晚期，但經(jīng)積極的綜合治療可獲得緩解，然而復(fù)發(fā)率高，生存率僅30％左右。因此需要探索治療NB的新途徑。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是一種具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂活性的血管形成因子，近年來(lái)的研究表明在NB的血管生成及NB細(xì)胞的增殖過(guò)程中VEGF發(fā)揮重要作

2、用，與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其表達(dá)高低與預(yù)后相關(guān)。VEGF通過(guò)上調(diào)bcl-2和survivin表達(dá)保護(hù)細(xì)胞免受凋亡刺激的影響。因此，抑制VEGF功能，減少細(xì)胞外VEGF含量，一方面可能影響VEGF與其受體特別是KDR結(jié)合，通過(guò)影響自分泌途徑，干擾其下游細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路，影響細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖，另一方面可以下調(diào)bcl-2和survivin表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增多，并可與化療藥物協(xié)同作用發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。 目的：探討NB患者腫瘤

3、組織中VEGF及其受體的表達(dá)與臨床的關(guān)系；探討NB患者血清VEGF水平的臨床意義；探討VEGF單克隆抗體——Bevacizumab對(duì)人NB細(xì)胞株(SK-N-SH)分泌VEGF的影響；探討B(tài)evacizumab單藥在體外對(duì)NB細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和細(xì)胞周期的影響，以及聯(lián)合化療藥物對(duì)NB有無(wú)抗腫瘤的協(xié)同作用。研究VEGF及其受體在NB中的作用機(jī)制，了解NB發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)特征，從而探索NB的治療新途徑。 材料方法：本研究收集N

4、B患者腫瘤組織標(biāo)本29例，中位年齡4歲，男性17例，女性12例，Ⅲ期11例，Ⅳ期18例，采用免疫組化法測(cè)定NB患者腫瘤組織中VEGF、VEGFR表達(dá)情況；收集初治或復(fù)發(fā)NB患者的血清30份，中位年齡4歲，男性21例，女性9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期18例。完全緩解或良好的部分緩解患者的血清24份，中位年齡5歲，男性15例，女性9例。Ⅲ期9例，Ⅳ期15例，并對(duì)其中16例治療后獲得完全緩解的患者治療前后分別取血清進(jìn)行檢測(cè)。另取28例健康兒童血清標(biāo)

5、本作為對(duì)照，男17例，女11例，中位年齡7歲。采用ELISA法測(cè)定NB患者血清VEGF水平及Bevacizumab對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-SH細(xì)胞上清液VEGF水平的影響；采用MTT法測(cè)定Bevacizumab對(duì)NB的細(xì)胞毒性作用及Bevacizumab聯(lián)合化療藥物對(duì)NB的細(xì)胞毒性作用；采用流式細(xì)胞儀法測(cè)定不同濃度Bevacizumab對(duì)NB細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響及Bevacizumab聯(lián)合不同化療藥物對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影

6、響。 結(jié)果：(1)NB腫瘤組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性22例，占75.9％，受體FLT-1陽(yáng)性11例，占37.9％，KDR陽(yáng)性21例，占72.4％。其中VEGF與FLT-1表達(dá)無(wú)相關(guān)性(p=0.68)，而與KDR表達(dá)具有相關(guān)性(p=0.04)。(2)初治/復(fù)發(fā)組患者血清VEGF水平(558.58±173.78ng/L)明顯高于對(duì)照組(300.46±99.14ng/L)及完全緩解/良好部分緩解(CR/GPR)組(216.62±83.36n

7、g/L)(p＜0.05)；Ⅲ期、Ⅳ期患者血清VEGF水平無(wú)明顯差異(p＞0.05)。16例CR患者治療后VEGF水平(326.96±208.82ng/L)明顯低于治療前水平(540.57±329.58ng/L)(p＜0.05)。(3)Bevacizumab雖呈劑量、時(shí)間依賴(lài)性抑制SK-N-SH細(xì)胞生長(zhǎng)，但其抑制率均小于15％；呈時(shí)間依賴(lài)性影響細(xì)胞周期分布，隨作用時(shí)間延長(zhǎng)G0-G1期細(xì)胞比例逐漸降低，S期細(xì)胞比例逐漸升高。低、中濃度(5μ

8、g/ml、10μg/ml)時(shí)，未發(fā)現(xiàn)明顯細(xì)胞凋亡，高濃度(50μg/ml)時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Bevacizumab與化療藥物DDP、VP16聯(lián)用時(shí)，可降低化療藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)，提高化療藥物的細(xì)胞毒作用，增敏倍數(shù)分別為4.72倍、9.79倍，同時(shí)可誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡，但不改變化療藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響；與化療藥物VCR、THP聯(lián)用時(shí)，無(wú)明顯化療增敏作用，未明顯增加細(xì)胞凋亡，且不改變化療藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響。 結(jié)論：(1)V