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1、本實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)體外酶切制備不同糖基化缺陷的血清IgA1,觀察糖基化缺陷的血清IgA1與HMC結(jié)合動(dòng)力學(xué)特征,并比較正常血清IgA1及糖基化缺陷的血清IgA1與HMC結(jié)合力的異同,從而明確IgAN中糖基化缺陷的IgA1分子在腎臟中沉積的機(jī)制?! 》椒?Jacalin親和層析提取正常人血清IgA1,唾液酸酶和/或半乳糖酶去除血清IgA1分子鉸鏈區(qū)O-糖上連接的唾液酸和/或半乳糖,形成糖基化缺陷的IgA1,即IgA1鉸鏈區(qū)暴露出更多的半
2、乳糖或N-乙酰氨基半乳糖。用特異結(jié)合半乳糖或N-乙酰氨基半乳糖的花生凝集素(peanutagglutinin,PNA),蠶豆凝集素(viciavillosa,VV),以ELISA的方法檢測(cè)酶切是否充分。SephacrylS-300分子篩層析柱分別確定正常人血清IgA1及去唾液酸IgA1(desialylatedIgA1,DesIgA1),去唾液酸去半乳糖IgA1(desialylated/degalactosylatedIgA1,Des
3、/DeGalIgA1)的平均分子量,125I-Na標(biāo)記并用放射配基法檢測(cè)并比較三種IgA1分子與體外培養(yǎng)的原代HMC的結(jié)合力。計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件中方差分析及S-N-K檢驗(yàn)對(duì)資料進(jìn)行分析,飽和曲線及Scatchard圖應(yīng)用Excel作圖及直線回歸分析。均以α=0.05作為統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)?! 〗Y(jié)論:人腎小球系膜細(xì)胞上存在特異結(jié)合IgA1的結(jié)合蛋白,唾液酸和半乳糖缺失的IgA1易聚合成大分子IgA1且與
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