Cbfa1全長cDNA的克隆及其對成纖維細(xì)胞軟骨相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、具有runt結(jié)構(gòu)域的Cbfal是骨發(fā)生和成骨細(xì)胞分化中非常關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子.最近研究發(fā)現(xiàn)Cbfal參與了肥大軟骨細(xì)胞的分化.為了更進(jìn)一步了解Cbfal在軟骨發(fā)生中的作用,我們研究了Cbfal對成纖維細(xì)胞中軟骨相關(guān)基因表達(dá)的影響.首先,應(yīng)用RT-PCR技術(shù),直接從E13.5天胎鼠肢芽細(xì)胞中克隆出Cbfal/Runx2全長cDNA,并將其定向克隆到pcDNA3.1質(zhì)粒載體中,經(jīng)酶切鑒定和序列分析證實(shí)了克隆的正確性.將pcDNA3.1-Cbfa

2、l/Runx2轉(zhuǎn)染到新生小鼠皮膚成纖維細(xì)胞中,48小時(shí)后收集細(xì)胞并用RT-PCR檢測Cbfal/Runx2的表達(dá)情況,結(jié)果顯示Cbfa1/Runx2獲得表達(dá);但在未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染pcDNA3.1質(zhì)粒組中沒有檢測到Cbfa1/Runx2的表達(dá).在構(gòu)建出Cbfa1真核表達(dá)載體后,將其轉(zhuǎn)化到成纖維細(xì)胞中,48小時(shí)后比較轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組Sox9、Sox5和Sox6的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況,72小時(shí)后比較轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組中Ⅱ型膠原的表達(dá).結(jié)果顯示Cbfa1/