周期性張應(yīng)力對成纖維細(xì)胞凋亡的影響及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：牙周膜成纖維細(xì)胞是牙周組織最主要的細(xì)胞成分，在功能上也是最重要的細(xì)胞，其組織結(jié)構(gòu)和功能可以隨外界不同刺激的改變而發(fā)生適應(yīng)性改建。成纖維細(xì)胞的增殖、分化及其凋亡在其改建過程中相互影響且缺一不可。因此任何影響成纖維細(xì)胞增殖、分化及其凋亡的因素都能導(dǎo)致牙周支持組織的破壞。本研究以體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞為研究對象，在成功構(gòu)建成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)—力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上，采用Hoechst33258細(xì)胞染色、TUNEL染色、流式細(xì)胞儀及Caspa

2、se-3活性檢測等方法探討周期性張應(yīng)力對成纖維細(xì)胞凋亡的影響，闡明Caspase-3在應(yīng)力介導(dǎo)的牙周膜成纖維細(xì)胞凋亡中的作用，明確應(yīng)力、成纖維細(xì)胞凋亡、Caspase-3三者之間的關(guān)系，為全面闡明咬合創(chuàng)傷的發(fā)病機(jī)理和尋找干預(yù)治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)提供新思路和理論依據(jù)。
　　 方法：構(gòu)建成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)—生物力學(xué)刺激模型，采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)，分別對待測細(xì)胞動態(tài)加載0h、6h、12h、24h的張應(yīng)力，其中0h為對照組。實(shí)驗(yàn)組細(xì)

3、胞的受力值為15％，頻率為10cycles/分，每一循環(huán)包括3-sstretch/3-srelaxation。采用Hoechst33258染色及TUNEL染色觀察細(xì)胞凋亡情況，以流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，同時檢測Caspase-3的活性。
　　 結(jié)果：Hoechst33258細(xì)胞染色結(jié)果顯示，對照組的細(xì)胞核為彌散均勻的圓形或橢圓形熒光，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見致密濃染的顆粒、新月體或環(huán)狀熒光。TUNEL染色結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組較對

4、照組的細(xì)胞核固縮，邊界清楚，細(xì)胞漿淡染，染色質(zhì)呈特異的棕黃色著染。流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期隨著加力時間的延長發(fā)生了變化，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞周期較對照組顯著延長。6h組，12h組加力的時間與細(xì)胞周期的延長呈正相關(guān)，且加力12h時達(dá)到高峰。然而，24h組的細(xì)胞周期卻出現(xiàn)了縮短。加力6h組，12h組的Caspase-3活性明顯高于對照組，而加力24h組的Caspase-3活性明顯低于12h組但高于對照組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示周期性張應(yīng)