氯通道在阿霉素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用.pdf

1、目的:1)研究氯通道在跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素中的作用;2)探討參與跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素的氯通道分子本質(zhì);3)探討內(nèi)源性ClC-3差異表達(dá)與藥物攝取及細(xì)胞藥物敏感性的相關(guān)性。
　　方法:以人低分化鼻咽癌細(xì)胞(CNE-2Z)及永生化人正常鼻咽上皮細(xì)胞(NP69-SV40T)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象,1)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄氯電流;2)熒光顯微示蹤法、熒光酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)阿霉素?zé)晒鈴?qiáng)度;3)免疫熒光與Western Blot技術(shù)檢測ClC-3氯通道蛋白

2、表達(dá);4)MTT法檢測細(xì)胞對阿霉素的敏感性;5)siRNA技術(shù)下調(diào)ClC-3氯通道蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.細(xì)胞外灌流47％低滲液激活細(xì)胞氯通道。與基礎(chǔ)狀態(tài)相比,低滲狀態(tài)下鼻咽癌細(xì)胞與鼻咽上皮細(xì)胞內(nèi)阿霉素的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。
　　2.氯通道阻斷劑DIDS抑制低滲激活的CNE-2Z細(xì)胞和NP69-SV40T細(xì)胞氯電流,且可抑制低滲引起的促進(jìn)阿霉素跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的作用。
　　3.在一定的時(shí)間與濃度范圍內(nèi),CNE-2Z與

3、NP69-SV40T細(xì)胞對阿霉素的攝取隨時(shí)間和濃度的增加而增強(qiáng),提示這兩種細(xì)胞對阿霉素的攝取呈非飽和狀態(tài)。
　　4.鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)源性ClC-3氯通道蛋白表達(dá)高于鼻咽上皮細(xì)胞;電生理結(jié)果示阿霉素激活CNE-2Z細(xì)胞氯電流密度明顯高于NP69-SV40T細(xì)胞,同時(shí),鼻咽癌細(xì)胞對阿霉素的攝取高于鼻咽上皮細(xì)胞。
　　5.干擾CNE-2Z細(xì)胞ClC-3氯通道蛋白表達(dá)后,阿霉素激活氯電流減小,CNE-2Z細(xì)胞對阿霉素的攝取減弱。