2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本研究分為二部分:
   第一部分:小鼠骨髓源性肥大細胞的培養(yǎng)及鑒定
   目的:利用小鼠骨髓干細胞體外誘導(dǎo)肥大細胞。
   方法:從小鼠股骨獲得骨髓細胞,放入含10[%]胎牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基中,加入三種不同濃度的刺激因子,即IL-3和SCF均為10ng/ml,15ng/ml 或20ng/ml,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4周,用免疫組化法觀察CD117的表達,流式細胞術(shù)檢測CD117和FcεRIα雙陽

2、性細胞的比例,甲苯胺藍染色法觀察細胞的成熟度,并與較常用的肥大細胞系P815做比較。
   結(jié)果:小鼠股骨骨髓細胞經(jīng)三種濃度的刺激因子誘導(dǎo)4周后均可獲得肥大細胞,10ng/ml和15ng/ml的因子作用后,流式細胞術(shù)檢測所得細胞:CD117和FcεRIα雙陽性的肥大細胞純度大于95[%],而20ng/ml時FcεRIα的表達卻有所降低,雙陽性的細胞僅達90[%],而P815細胞系幾乎不表達FcεRIα。免疫組化檢測顯示:培養(yǎng)獲得

3、的細胞大部分均表達CD117。甲苯胺藍染色發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)獲得的肥大細胞核被染成深藍色,胞漿中布滿大量紫紅色的顆粒,呈現(xiàn)肥大細胞的典型特征;而P815卻少見典型的紫紅色異染顆粒。
   結(jié)論:用IL-3和SCF各10ng/ml可在體外成功誘導(dǎo)高純度的小鼠骨髓源性肥大細胞,且其在表型和成熟度方面均優(yōu)于P815細胞系。
   第二部分:小鼠骨髓源性肥大細胞體外誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細胞的產(chǎn)生及機制探討
   目的:探索小鼠骨髓源性肥大

4、細胞能否在體外誘導(dǎo)CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞,并分析其可能機制。
   方法:從小鼠股骨獲取骨髓細胞,用IL-3和SCF各10ng/ml(完全RPMI 1640培養(yǎng)基)誘導(dǎo)四周。用甲苯胺藍染色法觀察肥大細胞異染顆粒;流式細胞術(shù)檢測CD117和FcεRIα雙陽性細胞比例。將肥大細胞與同基因來源的T細胞按不同比例(1:2,1:1,2:1)置于48孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),作為三個實驗組;未加肥大細胞的單獨T細胞組作對照組。四個

5、組均加入CD3 抗體和CD28 抗體各2μg/ml,IL-2 1000U/ml,5天后流式檢測Foxp3的表達情況;RT-PCR,免疫組化法檢測肥大細胞中TGF-β1的表達。在上述混培體系中加入TGF-β1中和性抗體(1ug/ml),5天后流式檢測Foxp3的表達情況。
   結(jié)果:與對照組相比,三個實驗組的Foxp3表達均升高(對照組:3.37%±0.40[%];
   三個實驗組依次為:8.23%±0.80[%],1

6、0.87%±1.25[%],13.63%±0.55[%])。且隨著肥大細胞比例的增加Foxp3+細胞的比例也增加。RT-PCR和免疫組化均觀察到TGF-β1的表達。而當加入TGF-β1中和性抗體后,F(xiàn)oxp3+細胞的比例明顯下降(三個實驗組依次為:4.47[%]±0.50[%],6.13[%]±0.35[%],6.40[%]±0.26[%])。
   結(jié)論:肥大細胞能在體外誘導(dǎo)T細胞轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細

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