口腔癌患者治療前后外周血中T淋巴細(xì)胞表型檢測的意義.pdf

1、目的:口腔頜面部的惡性腫瘤在我國以舌癌、牙齦癌、頰癌等較為常見,然而其發(fā)病原因是由多種因素造成的,如環(huán)境因素、精神因素、免疫因素等。其中免疫因素備受眾多學(xué)者的關(guān)注?？谇活M面部惡性腫瘤患者的免疫功能無論在早期或晚期病變均有可能比正常人群有所降低,以晚期病例尤為顯著。因此,機(jī)體的免疫狀態(tài)在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中有一定的參考價值。Fas/FasL是細(xì)胞凋亡的一條重要途徑,細(xì)胞凋亡失控是腫瘤發(fā)生的一個重要因素,故Fas/FasL引導(dǎo)的細(xì)胞凋亡

2、成為近年來醫(yī)學(xué)研究的熱點,Fas及其配體FasL系統(tǒng)的異常表達(dá),不僅參與了腫瘤發(fā)生過程中細(xì)胞凋亡異常的調(diào)節(jié),而且與腫瘤免疫逃逸機(jī)制有關(guān)。Fas、FasL的表達(dá)情況,是機(jī)體的免疫系統(tǒng)與腫瘤凋亡系統(tǒng)相互較量的一個重要環(huán)節(jié),本試驗旨在通過流式細(xì)胞術(shù)精確的檢測口腔癌患者治療前后外周血中T淋巴細(xì)胞各亞型的表達(dá)情況,主要是對CD4、Fas及FasL的檢測,探討Fas及FasL在口腔癌患者的發(fā)病機(jī)制所起的作用,使口腔癌的發(fā)病機(jī)制在免疫學(xué)的角度上得到進(jìn)

3、一步的深入了解,并為口腔癌的綜合治療提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法:各取新鮮靜脈血100μl,分別加入FITC標(biāo)記的CD3單克隆抗體,FITC標(biāo)記的CD4單克隆抗體,PE標(biāo)記的CD8單克隆抗體及PE標(biāo)記的CD56單克隆抗體各10μl,PE標(biāo)記的Fas單克隆抗體10μl、FITC標(biāo)記的CD4單克隆抗體與PE標(biāo)記的Fas單克隆抗體各10μl、PE標(biāo)記的FasL單克隆抗體10μl、FITC標(biāo)記的CD4單克隆抗體與PE標(biāo)記的FasL單

4、克隆抗體各10μl,在室溫下避光孵育1小時,向其內(nèi)加入紅細(xì)胞裂解液,裂解紅細(xì)胞5分鐘,加入PBS液洗去血紅蛋白,并重新懸浮于1mlPBS中,以流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞各表型占淋巴細(xì)胞總量的百分比和T淋巴細(xì)胞上Fas+及FasL+T淋巴細(xì)胞所占的百分比及CD4+/Fas+和CD4+/FasL+T淋巴細(xì)胞所占的比例,并計算CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞的比值。
　　 結(jié)果:
　　 1.治療前后口腔癌患者各項免疫指標(biāo)的變化

5、r>　　 1.1口腔癌患者術(shù)后外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+T淋巴細(xì)胞所占比例分別為63.23±4.96％,42.37±3.96％,24.46±3.86％,14.60±5.17％CD4+/CD8+比值范圍為1.77±0.34,CD3的表達(dá)較術(shù)前略有提高,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),與健康對照組相比,明顯降低(P＜0.05);CD4的表達(dá)較術(shù)前明顯提高,但低于正常對照組(P＜0.05);CD8的表達(dá)明顯比術(shù)前低(P

6、＜0.05),但與正常對照組的差別已無顯著性,CD4/CD8比值與術(shù)前相比明顯回升,但仍未恢復(fù)至正常對照組水平(P＜0.05),CD56的表達(dá)與術(shù)前比較明顯降低(P＜0.05),與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義。1.2口腔癌患者經(jīng)替加氟加奧沙利鉑化療,三周后再次采集患者外周血,檢測其外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+T淋巴細(xì)胞所占比例分別為63.56±9.68％,37.55±9.13％,25.79±6.74％,18.61±8.23

7、％,CD4+/CD8+比值范圍為1.57±0.43;CD3的表達(dá)與化療前無明顯差別(P＞0.05),CD4的表達(dá)較化療前明顯升高(P＜0.05),CD8的表達(dá)較化療前明顯降低(P＜0.05),CD4/CD8比值較化療前明顯升高(P＜0.05),CD56的表達(dá)較化療前無明顯變化。
　　 2治療前后口腔癌患者外周血中Fas、FasL的變化2.1口腔癌患者術(shù)后外周血中CD4+/Fas+、Fas+、CD4+/FasL+、FasL+T淋巴

8、細(xì)胞的比例分別為6.30±1.67％、1.98±0.93％、0.70±0.28％、0.99±0.28％。CD4+/Fas+在術(shù)后的表達(dá)與術(shù)前對比有明顯降低(P＜0.05);但Fas+的表達(dá)與術(shù)前比較無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05);CD4+/FasL+、FasL+的表達(dá)較術(shù)前均有明顯提高(P＜0.05)。2.2口腔癌患者經(jīng)替加氟加奧沙利鉑化療,三周后再次采集患者外周血,其外周血中CD4+/Fas+、Fas+、CD4+/FasL+、FasL+

9、T淋巴細(xì)胞的比例分別為8.36±2.12％、2.01±1.19％、0.62±0.19％、0.95±0.23％。CD4+/Fas+、Fas+的表達(dá)較化療前明顯升高(P＜0.05),CD4+/FasL+、FasL+的表達(dá)較化療前無明顯變化(P＞0.05)。
　　 3不同臨床因素與CD4+/Fas+、CD4+/FasL+表達(dá)的關(guān)系3.1口腔癌患者外周血中CIM+/Fas+、CD4+/FasL+的表達(dá)明顯高于正常對照組(P＜0.05),

10、Ⅲ+Ⅳ期患者的表達(dá)明顯高于Ⅰ和Ⅱ期的患者(P＜0.05);淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的口腔癌患者CD4+/Fas+的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P＜0.05),但CD4+/FasL+的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者之間無明顯差異。腫瘤直徑大于3cm組CD4+/Fas+的表達(dá)明顯高于腫瘤直徑不超過3cm組的表達(dá)(P＜0.05),而CD4+/FasL+的表達(dá)與腫瘤直徑大小無明顯相關(guān)性。3.2年齡、性別、吸煙因素的不同與口腔癌患者外周血中

11、Fas和FasL的表達(dá)無明顯相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 1口腔癌患者與健康人比較輔助性T淋巴細(xì)胞降低,抑制性T淋巴細(xì)胞增多,機(jī)體免疫功能存在不同程度的降低,手術(shù)及化療均可以解除部分免疫抑制現(xiàn)象,手術(shù)及化療對于口腔癌患者的治療是有效的。
　　 2口腔癌患者外周血中Fas的表達(dá)與腫瘤分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤的大小可能有關(guān),或許可以作為口腔癌診斷的一個免疫學(xué)標(biāo)記物。
　　 3Fas/FasL系統(tǒng)在機(jī)體內(nèi)