紫薯素對60Coγ輻射導(dǎo)致的小鼠胸腺細胞損傷的抑制作用及機制.pdf

1、目的：建立60Coγ輻射對體外培養(yǎng)的小鼠胸腺細胞損傷的病理模型,探討在60Co輻射下,紫薯素抑制60Co誘導(dǎo)的小鼠胸腺細胞輻射損傷的作用機制。
　　 方法：建立紫薯素干預(yù)60Coγ輻射小鼠胸腺細胞的模型。應(yīng)用MTT,首先檢測60Coγ輻射在0～12h范圍內(nèi)對小鼠胸腺細胞活力的影響,60Co分為0,2,4,6Gy四個不同劑量進行單次輻射。不同劑量的紫薯素預(yù)處理細胞,MTT檢測紫薯素對輻射細胞活力的影響、抗輻射的有效劑量以及其有無毒

2、性反應(yīng)。紫薯素對輻射細胞的作用檢測中,通過DNA ladder檢測細胞晚期凋亡;以流式細胞儀Annexin V-FITC/PI染色檢測細胞早期凋亡;流式細胞儀PI染色檢測細胞周期。
　　 探討紫薯素輻射防護作用的機制。測定紫薯素對氧化應(yīng)激的影響:2,7-二氯氫化熒光素二酯(DCFH-DA)為熒光探針,檢測紫薯素對60Co照射后細胞內(nèi)活性氧(ROS)的影響:酶生化法測定抗氧化酶過氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧物酶(GSH-p

3、x)的活力。研究紫薯素對60Co誘導(dǎo)小鼠胸腺細胞凋亡的線粒體通路的影響:JC-1熒光染色測定線粒體膜電位;western-blot檢測細胞色素C、caspase3和PARP的蛋白表達以及Bcl-2和Bax的蛋白表達;對caspase3和caspase9進行酶活性檢測。研究紫薯素對60Co誘導(dǎo)小鼠胸腺細胞凋亡的死亡受體通路的影響:RT-PCR檢測Fas mRNA:western-blot測定FADD的蛋白表達;caspase8酶活性的檢測

4、。檢測紫薯素對60Co誘導(dǎo)小鼠胸腺細胞的MAPK途徑的影響:western-blot測定磷酸化的ERK、JNK、p38MAPK的蛋白表達。探討紫薯素對60Co誘導(dǎo)小鼠胸腺細胞p53的影響:RT-PCR檢測p53 mRNA;Western-blot檢測p53、p21Cipl和p27Kipl的蛋白表達。
　　 結(jié)果：MTT結(jié)果顯示:60Coγ輻射作用于細胞,降低了細胞活力;輻射各組細胞活力從4h開始急劇衰減。4Gy輻射后4h的細胞活

5、力接近50％。本研究選擇了4Gy輻射后4h建立細胞損傷模型。輻射后,在0.625g/L～2.500g/L濃度范圍內(nèi),紫薯素能夠提升輻射小鼠胸腺細胞的活力,其提升細胞活力的能力與劑量呈量效依賴關(guān)系,而且在此劑量范圍內(nèi),紫薯素對細胞無毒性。DNA ladder顯示:輻射后小鼠胸腺細胞產(chǎn)生明顯的ladder,紫薯素干預(yù)使DNA ladder減弱。流式檢測顯示:紫薯素降低了輻射導(dǎo)致的小鼠胸腺細胞早期凋亡,同時緩解了輻射導(dǎo)致的G2/M期細胞周期阻

6、滯。
　　 紫薯素的防輻射機制試驗結(jié)果顯示:紫薯素降低了細胞內(nèi)ROS的含量,提高了抗氧化酶SOD與GSH-px的活性;穩(wěn)定了線粒體膜電位,減少細胞色素C的釋放,降低caspase3和PARP的蛋白表達,抑制caspase9和caspase3的酶活性,并使Bcl-2蛋白表達升高而Bax蛋白表達降低;對Fas mRNA和FADD蛋白表達無顯著作用,但中、高劑量的紫薯素對caspase8的酶活性有一定的提升;MAPK通路中,紫薯素對E

7、RK活性的影響不明顯,對磷酸化的JNK和p38MAPK表達有顯著的抑制作用;紫薯素提高p53 mRNA與p53的蛋白表達,抑制p27Kipl的蛋白表達,對p21Cipl蛋白表達的作用不明顯。
　　 結(jié)論:紫薯素能夠有效地抑制60Co輻射引起的小鼠胸腺細胞損傷,提高細胞活力,抑制細胞凋亡,緩解細胞周期阻滯。紫薯素的輻射防護機制包括:抑制了由60C0輻射誘導(dǎo)的細胞氧化損傷,降低ROS,提高抗氧化酶的活性,通過改善氧化還原狀態(tài)抑制輻射