UVB對人視網膜色素上皮細胞的輻射損傷及茶多酚的保護作用.pdf

1、年齡相關的黃斑性病變(Age-related macular degeneration,ARMD)是一種世界范圍內的眼科疾病。紫外輻射是產生過氧化脅迫的來源之一,能夠引起RPE細胞內部結構和形態(tài)的變化。太陽光譜中的UVB輻射會導致視網膜表皮損傷,進而引起包括ARMD在內的多種人體視網膜疾病。本實驗研究了紫外對RPE細胞的損傷情況及茶多酚對RPE細胞的保護和治愈效果。盡管對紫外引起的RPE細胞死亡的分子生物學機理仍在探索中,但是細胞內的氧

2、化脅迫是細胞死亡的主要原因。本研究主要利用人類RPE培養(yǎng)體系研究了茶多酚溶液協助其抵御和修復UVB輻射的影響。
　　 MTT實驗、光學顯微鏡觀察結果證明,經過100μW/cm2光強2小時的UVB輻射處理對細胞產生一定損傷,細胞形態(tài)發(fā)生明顯致損變化,由正常的梭形均勻分布到變圓簇聚成團。茶多酚溶液能夠減少UVB輻射產生的傷害。低濃度下,茶多酚溶液濃度與細胞存活率呈正相關,而高濃度的茶多酚溶液具有細胞毒性。
　　 利用電子顯微

3、鏡觀察RPE細胞超微結構,經過2小時紫外輻射后,RPE細胞微絨毛脫落,核仁消失,線粒體變形,空泡結構增多;而正常RPE細胞細胞質分布均勻,完整的細胞核及核仁完整,微絨毛豐富,線粒體脊狀結構清晰可見,狀態(tài)良好。經過70mg/L和140mg/L的茶多酚預處理的樣品中,細胞整體形態(tài)接近正常細胞,在140mg/L的茶多酚預處理的樣品中,大部分線粒體形態(tài)正常,而70mg/L的茶多酚預處理的樣品中部分線粒體呈現非正常的啞鈴狀;茶多酚后處理的樣品與預

4、處理組相近,但效果稍差,70mg/L和140mg/L的茶多酚后處理的樣品中線粒體均呈現啞鈴狀。電鏡觀察結果顯示茶多酚預處理和后處理均能削弱UVB誘導的RPE細胞損傷。
　　 DNA凝膠電泳結果顯示,正常細胞僅有一條清晰條帶,而在進行紫外輻射處理后,細胞因為輻射損傷死亡而產生大量的斷片化條帶。在預處理組中,140mg/L and70mg/L處理后,RPE細胞DNA條帶基本清晰;后處理組中效果略差,尤其是70mg/L處理效果不理想。

5、推測認為茶多酚溶液能夠抑制UVB引起的DNA損傷,促進DNA損傷的修復。
　　 茶多酚可以調節(jié)RPE細胞中c-fos、survivin兩種基因的表達。在茶多酚預處理組和后處理組中,survivin基因的表達被抑制。Survivin基因是凋亡抑制家族中的一員,survivin蛋白通過抑制caspase激活通道,從而減少對細胞程序性死亡。Survivin表達的紊亂導致細胞凋亡增加。這一結果表明茶多酚拮抗UVB引起的RPE細胞損傷可能