精氨酸及視黃酸對大鼠垂體生長調控相關miRNAs表達的影響.pdf

1、視黃酸是維生素A的活性代謝產(chǎn)物，在細胞生長、分化等過程中發(fā)揮重要作用。MicroRNAs(miRNAs)作為機體內重要調控物質，在性激素、生長激素等垂體激素分泌調節(jié)上亦扮演重要角色，但視黃酸作為小分子營養(yǎng)物質是否對垂體miRNAs的表達產(chǎn)生影響以及是否通過miRNAs途徑影響垂體生長激素仍沒有相關報道。本研究旨在探索視黃酸對大鼠垂體中生長調控相關 miRNAs的影響，以期發(fā)現(xiàn)視黃酸通過miRNAs調控垂體生長激素的新機制。
　　本

2、實驗首先選擇大鼠垂體瘤細胞（GH3細胞）為研究對象，篩選對垂體生長激素有作用的小分子營養(yǎng)物質；分別用不同濃度精氨酸（50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L和800μmol/L）和不同濃度視黃酸（0.1μmol/L,1μmol/L和10μmol/L）處理 GH3細胞，通過實時熒光定量 PCR，檢測其對垂體生長調控相關 miRNAs（miR-141-3p、miR-7a-5p、miR-375-3p和miR

3、-709）以及GH等基因表達的影響；然后以4周齡雄性SD大鼠為動物模型，連續(xù)飼喂視黃酸五周，實時熒光定量PCR檢測miRNAs和GH等基因表達情況；最后構建miR-141-3p的靶基因SOCS7以及miR-7a-5p的潛在靶基因MKNK2的真核過表達載體，初步研究其在GH3細胞上的功能。
　　本研究得到如下結果：
　　1．不同濃度的精氨酸處理GH3細胞24 h后，在800μmol/L時，miR-375-3p的表達顯著性提高，

4、在400μmol/L時，miR-7a-5p與miR-709表達量顯著性提高。同時在200μmol/L時，精氨酸可以促進GH1和PIT1的mRNA表達。
　　2.不同濃度的視黃酸處理GH3細胞36 h后，在1μmol/L時，視黃酸顯著抑制miR-7a-5p、miR-375-3p以及miR-709的表達，但顯著促進GH1和PIT1基因的mRNA表達。在0.1μmol/L時，視黃酸顯著抑制miR-141-3p的表達。
　　3.視黃

5、酸飼喂大鼠后，血清 IGF-1含量顯著上升，miR-141-3p、miR-7a-5p、miR-375-3p和miR-709的mRNA表達受抑制，但對GH1和PIT1 mRNA表達均有一定的促進作用。
　　4.成功構建了pcDNA3.1-SOCS7、pcDNA3.1-MKNK2和pcDNA3.1-ABHD8真核過表達載體，并初步發(fā)現(xiàn)SOCS7和MKNK2這兩個基因在GH3細胞中對GH1和PIT1具有促進作用。
　　而視黃酸可以