建立79對引物多重PCR新體系及其在假肥大肌營養(yǎng)不良基因診斷中的應(yīng)用.pdf

1、背景：假肥大型肌營養(yǎng)不良(DMD/BMD)是一種X-連鎖隱性遺傳性肌病，由包含79個(gè)外顯子的Dystrophin基因突變引起，其中缺失突變約占60-65％。龐大的基因結(jié)構(gòu)給缺失突變檢測帶來了一定困難:現(xiàn)有的多重PCR檢測法雖然簡單，但篩查范圍有限，而多重連接依賴探針法(MLPA)則檢測成本過高。因此，建立一種簡單，經(jīng)濟(jì)，有效的缺失突變篩查方法有助于該病的診斷、臨床分型和分子治療。
　　 目標(biāo)：建立79對引物多重PCR新體系，一次

2、性完成Dystrophin基因全部79個(gè)外顯子缺失的檢測，提高多重PCR對Dystrophin基因缺失突變的檢出率。
　　 方法：在原有的18對引物多重PCR基礎(chǔ)上，我們設(shè)計(jì)添加了61對引物，組裝成八組擴(kuò)增體系，在同一PCR反應(yīng)條件下，同時(shí)擴(kuò)增Dystrophin基因的全部外顯子，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離。采用上述方法對20例假肥大型肌營養(yǎng)不良患者進(jìn)行基因檢測，并與MLPA法對比驗(yàn)證，最終確定多重PCR新體系的建立。

3、>　　 結(jié)果：分別對20例假肥大型肌營養(yǎng)不良患者采用本方法和MLPA進(jìn)行檢測，79對引物多重PCR法檢出12例缺失突變(60％)，而MLPA法檢出11例缺失突變(55％)。MLPA法漏檢的一例，經(jīng)過PCR技術(shù)和基因測序技術(shù)驗(yàn)證，證實(shí)該例為第43號外顯子部分序列缺失，由于該缺失突變并未影響探針結(jié)合區(qū)，故MLPA結(jié)果為陰性。其余11例缺失患者的多重PCR結(jié)果均與MLPA結(jié)果吻合。
　　 結(jié)論：79對引物多重PCR法能夠有效地檢出D