缺失型假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥及其攜帶者檢測(cè)體系的完善及其應(yīng)用研究.pdf

1、目的： 1、建立快速、準(zhǔn)確、直觀(guān)的缺失型假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(DMD)患者檢測(cè)體系。 2、聯(lián)合多種檢測(cè)方法優(yōu)化缺失型DMD攜帶者的分子檢測(cè)體系，為攜帶致病基因的高危人群提供更為可靠的遺傳咨詢(xún)。 方法： 1、針對(duì)抗肌營(yíng)養(yǎng)不良基因(dystrophin)缺失突變熱區(qū)的11個(gè)外顯子，聯(lián)合應(yīng)用多重PCR及變性高效液相色譜(DHPLC)技術(shù)，對(duì)來(lái)自不同家系的35例DMD的患者進(jìn)行基因缺失突變檢測(cè)。 2、采用

2、競(jìng)爭(zhēng)性定量PCR分析及DHPLC技術(shù)，對(duì)缺失型DMD患者家系中的女性親屬相應(yīng)缺失外顯子拷貝數(shù)進(jìn)行相對(duì)定量分析。 3、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)缺失型DMD家系中女性親屬相應(yīng)缺失外顯子拷貝數(shù)進(jìn)行精確定量分析。 4、用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)競(jìng)爭(zhēng)PCR定量分析、DHPLC技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1、聯(lián)合應(yīng)用多重PCR及DHPLC技術(shù)發(fā)現(xiàn)35例DMD患者中有18例缺失

3、突變，其余17例未見(jiàn)缺失。DHPLC將不同的DNA片段以色譜峰的形式表現(xiàn)出來(lái)，正常對(duì)照呈11個(gè)不同的色譜峰，缺失型表現(xiàn)為部分色譜峰缺失。 2、聯(lián)合競(jìng)爭(zhēng)性定量PCR分析、DHPLC技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)上述檢出缺失型突變的18個(gè)DMD家系中的女性親屬進(jìn)行攜帶者檢測(cè)。3種檢測(cè)結(jié)果完全一致，發(fā)現(xiàn)攜帶者13人，正常個(gè)體13人。18例DMD患者中， 7例為新生突變所致，其余11例為家族遺傳突變所致。 結(jié)論： 1、