去鐵胺對白血病細(xì)胞K562-A02作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究探討鐵螯合劑去鐵胺(deferoxamine，DFO)對人白血病耐阿霉素細(xì)胞K562/A02的凋亡基因bax、bcl-2以及多藥耐藥基因1(multidrug resistance gene1，mdr1)/P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)表達(dá)影響，并探討其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的可能機(jī)制，為白血病的治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：采用四甲基偶氮唑藍(lán)法(3-(4，5-Dimethylthiazo

2、l-2-y1)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT)檢測不同濃度DFO對K562/A02細(xì)胞和K562細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)；流式細(xì)胞儀法(flow cytometry，F(xiàn)CM)分別檢測25、50、100和200μ mol/L DFO單獨或聯(lián)合1mg/L阿霉素(adfiamycin，ADM)作用K562/A02細(xì)胞48小時細(xì)胞的凋亡率；應(yīng)用4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(4'，6-diamidino-2-ph

3、enylindole，DAPI)染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)；半定量RT-PCR檢測各組細(xì)胞凋亡基因bax、bcl-2以及mdr1 mRNA水平變化；Westernblot檢測各組細(xì)胞P-gp蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果： K562/A02與K562對ADM的IC50值分別為(1.46±0.07)mg/L和(40.98±3.05)mg/L，耐藥倍數(shù)為28.06倍。予25、50、100和200μ mol/L DFO作用后，K562/A02細(xì)

4、胞對ADM的耐藥倍數(shù)分別為24.95、16.11和9.99倍。予以12.5、25和50μtmol/L DFO單獨處理K562/A02細(xì)胞48小時，凋亡率分別為(3.50±0.30)％、(7.27±0.32)％和(12.53±1.21)％，對照組K562/A02細(xì)胞凋亡率為(1.90±0.10)％，當(dāng)12.5、25和50μmol/LDFO聯(lián)合1mg/LADM處理K562/A02細(xì)胞48小時，凋亡率分別為(6.13±0.29)％、(9.57

5、±0.40)％和(18.97±1.10)％，各組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。DAPI染色可見隨著DFO濃度增加，細(xì)胞核逐漸呈現(xiàn)波紋狀或折縫樣，部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)，或細(xì)胞核染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。DFO聯(lián)合ADM處理細(xì)胞，隨著DFO濃度增加，bcl-2 mRNA水平下調(diào)，bax mRNA水平上調(diào)，與凋亡率變化情況呈正相關(guān)。mdr1 mRNA水平有所下降，且P-gp蛋白表達(dá)受抑。
　　 結(jié)