番茄紅素、瑪咖提取物對H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、天然來源的番茄紅素是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中最強(qiáng)的抗氧化劑，具有優(yōu)越的生理功能。作為一種功能性色素，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、防癌抗癌、抗菌消炎、保護(hù)心血管等多種生物學(xué)功能，素有“藏在西紅柿里的黃金”之美稱。瑪咖(Lepidium meyeniiWalp)是一種生長在秘魯海拔3700～4500米安第斯山脈當(dāng)?shù)氐氖只浦参?，具有抗疲勞、抗氧化、提高生育能力、抑制前列腺增生、改善性功能等多種功效，因此受到世界各國的廣泛關(guān)注。在所有的功效中，抗氧化功能

2、被認(rèn)為是行使所有功能的基礎(chǔ)。因此瑪咖、番茄紅素在抗氧化研究方面尤為重要。本實(shí)驗(yàn)對瑪咖、番茄紅素提取物細(xì)胞抗氧化機(jī)制進(jìn)行了初步的探究。實(shí)驗(yàn)主要分為以下幾個部分：
　　1.100μM、150μM、200μM、300μM、400μM濃度H2O2對PC12細(xì)胞處理4 h，MTT法測細(xì)胞存活率，確定H2O2濃度為150μM，建立細(xì)胞氧化損傷模型。
　　2.梯度濃度瑪咖、番茄紅素提取物對PC12細(xì)胞預(yù)處理24h后加入150μM H2O2

3、處理4 h進(jìn)行氧化損傷，MTT法測細(xì)胞存活率。確定實(shí)驗(yàn)所用瑪咖濃度為100、200、500μg/mL，番茄紅素提取物濃度為500、600、800μg/mL。
　　3.通過測定細(xì)胞外液中LDH的活力、細(xì)胞內(nèi)自由基、脂質(zhì)過氧化、谷胱甘肽(GSH)的水平和細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活性，確定瑪咖、番茄紅素提取物具有抗氧化活性并且抗氧化效果好于VE和番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品。最終確定了瑪咖的最適濃度為500μg/mL，番茄紅素提取物最適濃度為800μg/mL，

4、并用最適濃度進(jìn)行后續(xù)的研究。
　　4.通過測定線粒體膜電位的變化，觀察細(xì)胞早期凋亡情況。通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期的變化，對瑪咖、番茄紅素提取物抗氧化機(jī)制進(jìn)行了初步探究。結(jié)果表明，加入150μM H2O2后細(xì)胞線粒體膜電位下降，出現(xiàn)早期凋亡，但是通過流式測定顯示細(xì)胞晚期凋亡不明顯，S期細(xì)胞比例增加。加入瑪咖和番茄紅素提取物預(yù)處理后，細(xì)胞線粒體膜電位有了一定的恢復(fù)，S期阻滯降低，G2/M期細(xì)胞數(shù)目增多，說明細(xì)胞DNA損傷減少，細(xì)胞能