復(fù)方燈盞花滴丸對H2O2致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：研究復(fù)方燈盞花滴丸對氧化應(yīng)激致大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞（PC12細(xì)胞）損傷的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)PC12細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為6組：空白對照組，氧化損傷組（模型組），復(fù)方燈盞花滴丸不同濃度組（0.763μg/mL、3.052μg/mL、12.207μg/mL），陽性藥組（維生素E4.307μg/mL），藥物干預(yù)24h后，除空白對照組外，其余各細(xì)胞組用300μmol/L過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷

2、2h，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測：（1）倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；（2）線粒體琥珀酸脫氫酶（MTT）檢測細(xì)胞存活率；（3）光化學(xué)法測定細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）釋放的測定；（4）黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶（SOD）活性以及硫代巴比妥法測定丙二醛（MDA）含量；（5）一氧化氮(NO)含量檢測以及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）活性測定；（6）Annexin V-FITC/PI雙染法測細(xì)胞凋亡率；（7）免疫細(xì)胞化學(xué)法測定細(xì)胞色素C含量；（8）免疫

3、細(xì)胞化學(xué)法測定caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：300μmol/L的H2O2損傷細(xì)胞2h可明顯降低PC12細(xì)胞的增殖活性，增加LDH的外漏，提高細(xì)胞內(nèi)MDA含量，降低SOD活性，增高NO含量，提高iNOS活性，增加細(xì)胞色素C的釋放，提高caspase-3的表達(dá)，引起細(xì)胞凋亡，與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），表明H2O2所致PC12細(xì)胞損傷模型復(fù)制成功；不同濃度的復(fù)方燈盞花滴丸可提高PC12的MTT吸光度值，減

4、少細(xì)胞內(nèi)LDH的外漏，減少M(fèi)DA產(chǎn)生，增強(qiáng)SOD活性，減少NO的產(chǎn)生及降低iNOS活性，減少細(xì)胞色素C的釋放，減少caspase-3的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）。
　　結(jié)論：復(fù)方燈盞花滴丸可對過氧化氫所致的PC12細(xì)胞的損傷有保護(hù)作用，能提高PC12細(xì)胞的存活率及改善其形態(tài)，減少氧化損傷、細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能包括：（1）穩(wěn)定細(xì)胞膜；（2）增加清除氧自由基的能力，提高抗脂質(zhì)過氧化能力；（3）減少