組蛋白脫乙酰酶抑制劑對大鼠機(jī)械通氣引起肺損傷的影響.pdf

1、第一部分、建立機(jī)械通氣引起肺損傷的動物模型
　　目的：建立大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷(VILI)動物模型，研究VILI病理生理改變及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　建立大鼠VILI動物模型分為兩部分:第一部分按照機(jī)械通氣時間分組:雄性、健康的SD大鼠40只，體重在240-290之間，隨機(jī)分成A1、A2、A3、A4四組，每組各10只。A1組為空白對照組;A2組為大潮氣量通氣1h組;A3組為大潮氣量通氣2h組; A4組為大潮氣

2、量通氣4h組。A2-A4組潮氣量(VT)均為=42ml/kg，通氣頻率為40次/分，呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為0。四組動物于機(jī)械通氣或自主呼吸后放血處死大鼠，取肺組織，計算肺濕/干重比(W/D)，光鏡下觀測肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行肺損傷評分。同時檢測肺組織中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶(MPO)活性。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，檢測TNF-α，IL-1β和IL-6水平。檢測肺組織ICAM-1表達(dá)變化。第二部分按照機(jī)械通氣潮氣量分組:雄性、

3、健康的SD大鼠40只，體重在240-290之間，隨機(jī)分成B1、B2、B3、B4四組，每組各10只。B1組為空白對照組;B2組為小潮氣量通氣組，潮氣量(VT)為=7ml/kg，呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為3 cmH2O; B3組為中潮氣量通氣組，潮氣量(VT)為=20ml/kg，呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為0;B4組為大潮氣量通氣組，潮氣量(VT)為=42ml/kg，呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為0。B2、B3、B4組通氣頻率為40次/分。

4、四組動物于機(jī)械通氣或自主呼吸后放血處死大鼠，取肺組織，計算肺濕/干重比(W/D)，光鏡下觀測肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行肺損傷評分。同時檢測肺組織中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶(MPO)活性。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，檢測TNF-α，IL-1β和IL-6水平。Real-time PCR及Western blot檢測肺組織ICAM-1基因及蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.A組組織學(xué)損傷性改變:
　　光鏡下可見:A1組肺組織

5、無明顯的組織學(xué)損傷性改變;A2組肺組織病理改變較明顯，如:肺組織毛細(xì)血管充血，肺泡間隔增厚腫脹，肺泡腔內(nèi)有較多的炎性細(xì)胞浸潤，肺泡腔可見滲出的液體，部分肺泡腔萎縮不張;A3組肺組織病理改變加重;A4組肺組織病理改變非常顯著;和A1組相比，A2、A3、A4組ALI評分均顯著性增高(P＜0.01);和A2組比較，A3、A4兩組ALI評分顯著性增高(P＜0.01);和A3組比較，A4組ALI評分顯著性增高(P＜0.01)。
　　2.A組

6、濕干重(W/D)比值、MPO活性，TNF-α、IL-1β和IL-6含量，ICAM-1的基因和蛋白表達(dá)-和A1組相比，A2、A3、A4組濕干重(W/D)比值、MPO活性，TNF-α、IL-1β和IL-6含量，ICAM-1的基因和蛋白表達(dá)均顯著性升高(P＜0.01);和A2組相比，A3、A4組上述指標(biāo)顯著性升高(P＜0.01);和A3組相比，A4組上述指標(biāo)值顯著性升高(P＜0.01)。
　　3.B組組織學(xué)損傷性改變:
　　B1、

7、B2組肺組織無明顯病理改變，肺泡間隔正常，偶見少量的炎性細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞，肺泡腔無滲出物;B3組肺組織病理改變明顯，肺泡間隔增厚，肺泡腔內(nèi)可見較多的炎性細(xì)胞，部分肺泡腔內(nèi)有血性滲出液;B4組肺組織病理改變明顯加重，肺泡間隔明顯增厚，肺泡腔中炎性細(xì)胞顯著增多，肺泡腔中可見明顯的血性滲出液。和B1、B2組比較，B3、B4兩組ALI評分顯著性增高(P＜0.01);和B3組比較，B4組ALI評分顯著性增高(P＜0.01)。
　　4.B組濕

8、干重(W/D)比值、MPO活性，TNF-α、IL-1β和IL-6含量，ICAM-1的基因和蛋白表達(dá)和B1、B2組相比，B3、B4這兩組W/D和MPO值，TNF-α、IL-1β和IL-6含量，ICAM-1的基因和蛋白表達(dá)均顯著性升高(P＜0.01);和B3組相比， B4組W/D和MPO值，TNF-α、IL-1β和IL-6含量，ICAM-1的基因和蛋白表達(dá)顯著性升高(P＜0.01)。
　　結(jié)論：大潮氣量(42 ml/kg)機(jī)械通氣對大

9、鼠產(chǎn)生了較為明顯的急性肺損傷，其損傷程度隨著通氣時間的延長而加重。
　　第二部分、組蛋白脫乙酰酶抑制劑對VILI的保護(hù)作用
　　目的：探討組蛋白脫乙酰酶抑制劑對大鼠機(jī)械通氣誘導(dǎo)的急性肺損傷的影響及可能的機(jī)制。
　　方法：
　　40只SD大鼠隨機(jī)分為四組(n=10):小潮氣量機(jī)械通氣組（LV組）;大潮氣量機(jī)械通氣組（HV組）;TSA治療組（HV+TSA組）;SAHA治療組(HV+ SAHA組)。LV組行小潮氣量（V

10、T7ml/kg、RR40次/min），其余三組均行大潮氣量（VT42ml/kg、 RR40次/min），四組均機(jī)械通氣2h。HV+TSA，HV+ SAHA組經(jīng)腹腔注射TSA(2mg/kg)，或SAHA(200 mg/kg)，LV組和HV組于機(jī)械通氣前30mins經(jīng)腹腔注射等容積量的PBS。30分鐘后同第一部分給予大鼠機(jī)械通氣。四組動物于機(jī)械通氣后放血處死大鼠，取肺組織，計算肺濕/干重比(W/D)，光鏡下觀測肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行肺損傷評

11、分。同時檢測肺組織中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶(MPO)活性。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，檢測TNF-α，IL-1β和IL-6水平。Real-time PCR及Western blot檢測肺組織ICAM-1基因及蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.肺組織病理改變LV組肺組織無明顯病理改變，肺泡間隔薄，且均勻一致，偶見少量的炎性細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞，肺泡腔無滲出物;大潮氣量組(HV組)肺組織病理改變明顯加重，肺泡間隔明顯增厚，肺泡

12、腔中炎性細(xì)胞顯著增多，肺泡腔中可見明顯的血性滲出液，部分肺泡腔萎縮不張。組蛋白脫乙酰酶抑制劑治療組(HV+ TSA組和HV+ SAHA組):與大潮氣量組比較，肺泡壓縮明顯減輕，肺泡間隔增寬程度明顯減輕，肺間質(zhì)腫脹程度明顯減輕，肺泡腔滲出明顯減輕。和HV組相比，HV+ TSA組和HV+ SAHA組ALI評分均顯著性降低(P＜0.01);
　　2.肺組織W/D比和MPO活性，TNF-α、IL-1β和IL-6含量，ICAM-1的基因和蛋