組蛋白去乙?；敢种苿?duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響及可能的調(diào)節(jié)機(jī)制.pdf

1、背景：
　　在泌尿系統(tǒng)腫瘤中，腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是導(dǎo)致死亡的第三大原因，在成年人惡性腫瘤中約占2-3％，盡管現(xiàn)代診療技術(shù)不斷提高，但仍有約30%的腎細(xì)胞癌患者會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移。外科手術(shù)是治療早期和局部晚期腎細(xì)胞癌的主要方法，對(duì)于晚期轉(zhuǎn)移性腎癌患者，以化學(xué)治療及放射治療為主，但效果不佳。其治療一直是個(gè)棘手的問(wèn)題，因此迫切需要尋找新的治療方法。
　　組蛋白乙?；?(histone actyl

2、ase, HAT)和組蛋白去乙?；福╤istone deacetylase, HDAC）是功能相反的兩種酶，其中HAT的作用是使組蛋白末段乙?；?，舒展核小體結(jié)構(gòu)、激活基因轉(zhuǎn)錄，而HDAC的功能則為抑制基因轉(zhuǎn)錄。它們共同調(diào)節(jié)組蛋白乙?；钠胶膺M(jìn)而影響染色體的折疊和基因轉(zhuǎn)錄，組蛋白乙?；氖Ш馀c基因沉默、腫瘤惡性病變、細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞信號(hào)異常有關(guān)。HDAC異常表達(dá)是組蛋白乙酰化水平紊亂的關(guān)鍵因素，并且HDAC異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)

3、系，抑制HDAC活性被認(rèn)為是有效的抗腫瘤途徑。
　　目的：
　　體外研究組蛋白去乙?；敢种苿╤istone deacetylase inhibitors，HDACi）曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)和帕比司他（panobinostat, LBH589）對(duì)人腎癌細(xì)胞株增殖、細(xì)胞周期分布及凋亡的影響，并進(jìn)一步探討其可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　用LBH589或TSA作用于人腎癌細(xì)胞株OS-R

4、C-2，在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)用四甲基偶氮唑藍(lán)方法（MTT）檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率并檢測(cè)出最佳刺激濃度和時(shí)間；用流式細(xì)胞技術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)不同藥物作用前后腎癌細(xì)胞周期變化情況及凋亡情況；用蛋白印記技術(shù)（western blots）分析不同藥物作用前后腎癌細(xì)胞內(nèi)c-Jun、磷酸化c-Jun（p-c-Jun）、 Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)變化。用JNK抑制劑SP600125阻斷JNK信號(hào)通路后，觀察SP600125預(yù)處理+

5、TSA組較TSA單獨(dú)處理腎癌細(xì)胞周期、凋亡及凋亡相關(guān)蛋白的變化情況。
　　結(jié)果：
　　TSA和LBH589在體外均可抑制腎癌細(xì)胞生長(zhǎng)，且具有濃度與時(shí)間依賴性；TSA與LBH589最佳刺激濃度分別為1μM、100nM，最佳刺激時(shí)間分別為72h、48h；FCM檢測(cè)到 TSA或 LBH589組細(xì)胞周期發(fā)生變化，與對(duì)照組相比，處理組發(fā)生 G2/M期周期阻滯（p<0.05）；與對(duì)照組比較，TSA或 LBH589處理組腎癌細(xì)胞發(fā)生明顯凋

6、亡（p<0.05）。Western blots顯示TSA和LBH589均能明顯促進(jìn)p-c-jun蛋白水平表達(dá)，同時(shí)TSA也能誘導(dǎo)Bax蛋白表達(dá)而抑制Bcl2蛋白表達(dá)，與對(duì)照組相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；與TSA單獨(dú)處理組相比，JNK抑制劑SP600125預(yù)處理+TSA組能部分減弱TSA對(duì)腎癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)，同時(shí)能逆轉(zhuǎn)TSA誘導(dǎo)的腎癌細(xì)胞G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：