抑制脂肪酸合酶誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制.pdf

1、目的：
　　脂肪酸的代謝是細(xì)胞生命活動中的重要一環(huán)，對于癌細(xì)胞來說尤為重要，因為不停生長的癌細(xì)胞需要大量脂肪酸來組成它們的膜系統(tǒng)。脂肪酸合酶（FAS， fatty acid synthase）是脂肪酸合成過程中的一個關(guān)鍵酶，幾乎所有癌細(xì)胞都高表達(dá)FAS，而相比之下在絕大多數(shù)正常組織的細(xì)胞中FAS則難以發(fā)現(xiàn)，和臨床有著密切聯(lián)系。
　　我們的前期研究表明乳腺癌細(xì)胞中存在著異常的脂肪酸合成---氧化循環(huán)代謝平衡，而且這個平衡對乳腺

2、癌細(xì)胞的生長是必須的。本課題以乳腺癌細(xì)胞系為基本模型，研究抑制脂肪酸合酶誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞死亡的分子機(jī)制，從而揭示異常脂肪酸代謝對于腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程的意義。
　　方法：
　　1.利用Western blot技術(shù)檢測脂肪酸合成關(guān)鍵酶（FAS）在不同乳腺癌細(xì)胞系，不同組癌旁和癌組織中的表達(dá)水平。
　　2.利用細(xì)胞計數(shù)法記錄不同細(xì)胞系增殖情況，判斷乳腺癌細(xì)胞系內(nèi)脂肪酸代謝是否與細(xì)胞增殖速度的快慢有關(guān)系。
　　3.脂肪酸代

3、謝關(guān)鍵酶抑制劑（Cerulenin、Orlistat）以及shRNA處理乳腺癌細(xì)胞抑制脂肪酸的合成，檢測對其影響。
　　4.用FAS特異性抑制劑Cerulenin處理，DCFH-DA探針、DHE探針測定細(xì)胞內(nèi)ROS水平。
　　5.使用抗氧化劑NAC、Trolox、BHA以及過氧化氫氧化酶抑制劑DPI是否能保護(hù)抑制FAS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　6.細(xì)胞流式檢測線粒體膜勢能變化以及細(xì)胞色素C的釋放。
　　7.過表達(dá)Bc

4、l-2家族基因中的Bcl-2、Bclxl能否保護(hù)抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)的凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot技術(shù)檢測顯示乳腺癌組織，乳腺癌細(xì)胞系中高表達(dá)FAS。
　　2.乳腺癌細(xì)胞中脂肪酸合成酶的表達(dá)和細(xì)胞生長無正相關(guān)性。
　　3.使用脂肪酸合成酶抑制劑能抑制腫瘤細(xì)胞的生長，甚至殺死腫瘤細(xì)胞。
　　4.Knock down FAS抑制乳腺癌細(xì)胞的生長與轉(zhuǎn)化。
　　5.抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)氧化

5、應(yīng)激引起氧化還原代謝紊亂。
　　6.抗氧化劑 NAC能保護(hù)抑制脂肪酸合成引起的細(xì)胞凋亡；Trolox、BHA以及DPI不能保護(hù)抑制FAS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　7.抑制脂肪酸合成破壞線粒體膜勢能，釋放Cytochrome C誘導(dǎo)凋亡。
　　8. Bcl-2家族能維持線粒體膜的穩(wěn)定性從而保護(hù)抑制脂肪酸合成誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論：
　　腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在異常的脂肪酸代謝，脂肪酸合成代謝除了為快速增殖的腫瘤細(xì)胞提供