冬凌草甲素經(jīng)線粒體通路誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:
　　研究冬凌草甲素(oridonin, ORI)體外抗腫瘤作用及ORI誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　方法:
　　用不同濃度ORI分別作用人食管癌SHEEC細(xì)胞株不同時(shí)間,噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢測細(xì)胞生長抑制率;透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡尤其是線粒體的超微結(jié)構(gòu)改變;原位末端標(biāo)記/碘化吡啶( TUNEL/PI)雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期;羅丹明123(Rho123)染色流式細(xì)胞術(shù)檢測線粒體膜電位(△

2、ψm);Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)變化;RT-PCR檢測相關(guān)基因的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　在體外抗腫瘤作用方面,ORI對 SHEEC細(xì)胞的生長有顯著的抑制效應(yīng),64μg/ml的ORI作用24h、48h及72h對SHEEC細(xì)胞生長的抑制率分別為78.7％、89.5%及91.7%;8、16、32μg/ml的ORI作用24h后,透射電鏡下均觀察到多數(shù)細(xì)胞核呈明顯的染色質(zhì)凝塊邊集的凋亡現(xiàn)象;流式細(xì)胞儀檢測凋亡率分

3、別為9.3%、21.1%和47.7%,同步細(xì)胞周期圖像顯示凋亡峰趨于明顯,同時(shí)有S期的逐漸抬高。
　　在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制方面,32μg/ml的ORI作用2h后,電鏡下可見線粒體在細(xì)胞核出現(xiàn)變化之前已發(fā)生形狀改變,作用8h后,線粒體內(nèi)部結(jié)構(gòu)消失,細(xì)胞核呈細(xì)胞凋亡的典型改變;8、16、32μg/ml的ORI作用24h,Rho(-)細(xì)胞比例分別是3.2%、9.8%和45.7%,同時(shí)檢測到蛋白細(xì)胞色素C(CytC)、Caspase-9表