貞芪益肝方對急性免疫性肝損傷保護作用的臨床與實驗研究.pdf

1、目的:
　　乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行，已成為嚴重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題。研究認為，HBV誘導的機體適應性免疫是造成肝臟炎癥的罪魁禍首，而非HBV本身。免疫機制是慢性乙型肝炎發(fā)病的主要機制。目前該病的主要治療手段有抗病毒、免疫調節(jié)、改善肝功能和抗肝纖維化等?？共《舅幬锇ê塑眨ㄋ幔╊愃莆锖透蓴_素。但核苷（酸）類似物易導致病毒變異;干擾素適應面窄，副作用大，價格昂貴，遠期療效欠佳。且這些藥物對作為病毒RNA復制模板的

2、共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)均無作用，難以徹底清除病毒，停藥后復發(fā)率較高。
　　導師認為，慢性乙型肝炎是因機體正氣不足，濕熱疫毒侵襲而致。病變由氣入血，肝脾不調，故見腹脹、納呆及乏力;血脈受病，肝絡瘀阻，發(fā)為脅痛，膽汁內淤，溢為黃疸。治療上應扶正祛邪并舉。經多年臨床實踐，創(chuàng)制出貞芪益肝方。全方由黃芪、女貞子、靈芝、田基黃、首烏藤、板藍根等12味藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰、清熱利濕、解毒扶正的功效。對慢性乙型肝炎有較好的臨床療效。

3、為總結推廣該方，我們開展了該方治療急性免疫性肝損傷的臨床與實驗研究。臨床研究方面，通過和西藥恩替卡韋片的隨機對照研究，評價該方的臨床療效;實驗研究方面，以尾靜脈注射刀豆蛋白A制備免疫性肝損傷動物模型，分別從對肝細胞壞死、凋亡及再生作用方面評價該方療效，探討其抗肝損傷的作用機制。
　　方法:
　　1.臨床研究共觀察71例慢性乙型肝炎患者，治療組40例，用貞芪益肝方治療，每日一劑，每次煎服300ml，每天2次;對照組31例，用抗

4、病毒藥物恩替卡韋片治療，每次0.5mg，每日一次。兩組均治療6個月，分析治療前后的癥狀體征積分、肝功能及病毒學指標變化情況。
　　2.實驗研究將120只雌性KM小鼠隨機分為6組:貞芪益肝方高、中、低劑量組、聯苯雙酯組、模型組和正常對照組。除正常對照組外，其他各組予刀豆蛋白A(15mg/kg)尾靜脈注射制備急性免疫性肝損傷模型。造模成功后，貞芪益肝方各劑量組及聯苯雙酯組給予相應藥物灌胃，模型組及正常對照組則給予等體積生理鹽水灌胃，共

5、治療7天。每天分別從各組中取3只小鼠，取血及肝臟標本，應用ELISA法檢測血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)和白介素10(IL-10)水平;應用免疫組化法檢測肝組織中Fas、FasL、Bax、Bcl-2、PCNA含量。實驗結果以均數±標準差表示，采用重復測量方差分

6、析比較各組療效，以P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。
　　成果:
　　1.臨床研究
　　兩組患者在性別、年齡、病史、病情分級、癥狀體征積分、肝功能、血清HBV-DNA水平等基線資料比較上無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。6個月后的臨床觀察統(tǒng)計結果顯示:①治療組和對照組均能改善患者的臨床癥狀及體征，治療組在改善患者的胃部滿悶、腹部脹滿、寐艱多夢、大便粘滯和小便黃赤癥狀方面優(yōu)于對照組（P＜0.05）;②治療組和對照組均能促進血清HB

7、eAg陰轉，降低血清HBV-DNA水平，改善患者肝功能，兩組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;③在臨床療效比較方面，治療組總有效率為55％，對照組為51.6％，但兩組比較無顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.05）;④在證候療效比較方面，治療組總有效率為95％，對照組為77.4％，治療組優(yōu)于對照組(P＜0.05）。
　　2.實驗研究
　　(1)貞芪益肝方對小鼠血清ALT、AST水平的影響經刀豆蛋白處理后，與正常對照組比較，模型組、貞芪益

8、肝方各劑量組及聯苯雙酯組血清ALT和AST水平均不同程度升高(P＜0.01)。與模型組比較，貞芪益肝方各劑量組及聯苯雙酯組血清ALT及AST升高幅度減少，在血清AST降低幅度上，高劑量組優(yōu)于聯苯雙酯組(P＜0.05)。
　　(2)貞芪益肝方對小鼠血清MDA、SOD水平的影響經刀豆蛋白處理后，與正常對照組比較，模型組、貞芪益肝方各劑量組及聯苯雙酯組血清MDA水平均不同程度升高，SOD水平均不同程度降低（P＜0.01）。與模型組比較，

9、高中低劑量組及聯苯雙酯組血清MDA升高幅度及SOD降低幅度減少。在血清SOD降低幅度上，高劑量組優(yōu)于聯苯雙酯組(P＜0.05)。
　　(3)貞芪益肝方對小鼠血清TNF-a、IFN-γ、IL-4、IL-6及IL-10水平的影響經刀豆蛋白處理后，與正常對照組比較，模型組、貞芪益肝方各劑量組及聯苯雙酯組血清TNF-a、IFN-γ、IL-6水平均有不同程度升高，IL-4、IL-10水平均有不同程度降低（P＜0.01）。與模型組相比，貞芪益

10、肝方各劑量組及聯苯雙酯組升高及降低幅度均減少。除血清IFN-γ外，高劑量組優(yōu)于聯苯雙酯組(P＜0.05)。
　　(4)貞芪益肝方對小鼠肝組織Fas、FasL、Bax、Bcl-2、PCNA含量的影響經刀豆蛋白處理后，與正常對照組比較，模型組、貞芪益肝方各劑量組及聯苯雙酯組Fas、FasL、Bax、PCNA表達水平均不同程度升高，BCL-2表達水平不同程度下降（P＜0.01）。與模型組比較，貞芪益肝方各劑量組及聯苯雙酯組Fas、Fas

11、L、Bax、PCNA表達水平升高，BCL-2表達水平下降;在PCNA表達水平方面，貞芪益肝方高劑量組優(yōu)于聯苯雙酯組。
　　(5)肝臟病理學觀察:正常對照組肝小葉中央可見中央靜脈，小葉中可見肝細胞組成的肝板結構，肝板之間為肝血竇;模型組肝小葉中可見大片狀壞死區(qū)域，周圍可見炎性細胞浸潤，小葉結構破壞;貞芪益肝方高劑量組和聯苯雙酯組肝小葉中肝細胞腫脹明顯呈氣球樣改變;貞芪益肝方中劑量組肝小葉中可見點狀壞死區(qū)域，周圍可見炎性細胞浸潤;貞芪

12、益肝方低劑量組肝小葉中央靜脈周圍可見點狀壞死區(qū)域，周圍可見炎性細胞浸潤。
　　結論:
　　1.臨床研究
　　貞芪益肝方能改善慢性乙型肝炎患者的臨床癥狀體征及肝功能;降低病毒載量;有較高的血清轉換率;能有效治療慢性乙型肝炎。
　　2.實驗研究:
　　(1)小鼠經尾靜脈注射刀豆蛋白A后，8小時后血清ALT及AST水平明顯升高，造模成功。
　　(2)應用貞芪益肝方后，與模型組相比，小鼠血清ALT及AST水平

13、明顯降低，說明貞芪益肝方對免疫性肝損傷小鼠模型具有保護作用，具有顯著的保肝降酶作用。
　　(3)應用貞芪益肝方后，與模型組相比，小鼠血清MDA水平升高及SOD降低幅度減少，說明貞芪益肝方具有抗氧化、減輕肝損傷的作用。
　　(4)應用貞芪益肝方后，與模型組相比，血清TNF-a、IFN-γ及IL-6水平升高幅度及IL-4和IL-10降低幅度均減少，病理損害減輕。說明貞芪益肝方可能通過下調促炎因子，上調抑炎因子，調節(jié)Th1/Th2