肝素預(yù)抗凝對(duì)沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉和大鼠心肺復(fù)蘇后腦復(fù)蘇的影響.pdf

1、本研究采用沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉前和大鼠窒息性心跳停止前(CA)肝素預(yù)抗凝改變血液凝固狀態(tài)預(yù)防血栓形成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察研究抗凝對(duì)沙土鼠直接腦缺血和大鼠窒息性心跳停止后心肺腦復(fù)蘇影響。 研究材料與方法： 一、抗凝對(duì)沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉10分鐘后腦復(fù)蘇影響實(shí)驗(yàn) 成熟沙土鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(組Ⅰ，lO只，無麻醉、手術(shù))，假手術(shù)組(組Ⅱ，10只，麻醉、手術(shù))，非抗凝組(組Ⅲ，30只，夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈10分鐘但不抗凝)和

2、抗凝組(組Ⅳ，30只，頸總動(dòng)脈夾閉前肝素50IU/100g預(yù)抗凝)。組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ試驗(yàn)動(dòng)物戊巴比妥鈉40mg/kg體重腹腔注射麻醉。麻醉完善后三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頸部備皮消毒，正中切口，游離頸總動(dòng)和右側(cè)頸靜脈并置入靜脈套管針備實(shí)驗(yàn)中給藥。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分配到組Ⅰ后和灌注取腦之前進(jìn)行神經(jīng)學(xué)功能損害(ND)評(píng)分。組Ⅱ?qū)嶒?yàn)動(dòng)物清醒后三通靜脈注射生理鹽水0.5ml后結(jié)扎血管縫合皮膚，并在實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行ND評(píng)分。組Ⅲ實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清醒后無創(chuàng)傷微血管動(dòng)脈夾夾閉雙

3、側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷血流，10分鐘時(shí)靜脈給與腎上腺素0.01mg/kg，同時(shí)開放雙側(cè)動(dòng)脈夾恢復(fù)腦血流。組Ⅳ實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清醒前先行給與肝素50IU/100g，余同組Ⅲ。 實(shí)驗(yàn)過程中觀察記錄組Ⅲ、Ⅳ頸總動(dòng)脈夾閉后出現(xiàn)昏迷、呼吸困難的時(shí)間以及動(dòng)脈開放后到意識(shí)，翻正反射、出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)、覓食行為及運(yùn)動(dòng)平穩(wěn)及出現(xiàn)的時(shí)間。 對(duì)實(shí)驗(yàn)前四組，以及組Ⅲ、Ⅳ動(dòng)脈開放后20 min、60 min、24h、48h和72h時(shí)四組神經(jīng)系統(tǒng)功能損害(ND)進(jìn)行評(píng)分。

4、記錄實(shí)驗(yàn)后前后各組體重以及組Ⅲ、Ⅳ實(shí)驗(yàn)過程中存活和死亡率的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物例數(shù)。顯微鏡下對(duì)四組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的海馬(CA1～3)區(qū)、皮層、丘腦、小腦、殼-尾核腦和小腦五腦區(qū)進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)損害差(HD)評(píng)分，觀察海馬區(qū)(CA1～3)神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化，比較各組海馬CA1～3區(qū)TNF-α，IL-1β免疫組化陽性染色細(xì)胞百分率差異性。 二、抗凝對(duì)大鼠心跳驟停后心肺腦復(fù)蘇(CPCR)影響實(shí)驗(yàn) SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組(組Ⅰ，10

5、只，無麻醉、手術(shù))，假手術(shù)組(組Ⅱ，10只，麻醉、手術(shù)但無窒息)，非抗凝組(組Ⅲ，25只)和抗凝組(組Ⅳ，25只，窒息性心跳停止前肝素50IU/100g預(yù)抗凝)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分配到組Ⅰ后，稱體重和神經(jīng)系統(tǒng)損害(ND)評(píng)分后放回飼養(yǎng)籠飼養(yǎng)，72小時(shí)后再次稱重和ND評(píng)分。分配到組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ試驗(yàn)動(dòng)物稱重和ND評(píng)分后戊巴比妥鈉45mg/kg體重腹腔注射麻醉，完善后經(jīng)口喉鏡直視氣管插管，深度5.0-5.5cm處固定。連接二氧化碳探頭連續(xù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測呼吸末

6、二氧化碳分壓(P<,E>tCO<,2>)，吸入100％氧氣機(jī)械通氣，潮氣量1ml/100g，頻率40-60次/min，維持R<,E>tCO<,2>正常(35～45mmHg)。內(nèi)置式傳感器插入直腸連續(xù)監(jiān)測體溫，針式電極連續(xù)監(jiān)測心率(HR)和ECG。游離右股動(dòng)、靜脈并置管，動(dòng)脈接傳感器連續(xù)監(jiān)測平均動(dòng)脈壓(MABP)，靜脈接微量輸液泵持續(xù)輸液。實(shí)驗(yàn)過程中調(diào)整變溫手術(shù)臺(tái)溫度，維持肛溫(TR)正常(37.8～38.7℃)。組Ⅱ?qū)嶒?yàn)過程中肌肉松弛、

7、持續(xù)機(jī)械通氣、維持MABP(70～100mmHg)、HR(260～369次/min)、P<,E>tCO<,2>、TR在正常范圍，60min后停止機(jī)械通氣拔出氣管導(dǎo)管，72小時(shí)后再次稱重和ND評(píng)分。組Ⅲ、組Ⅳ(窒息性心跳停止前肝素50IU/100g預(yù)抗凝)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物窒息8分鐘，腎上腺素和標(biāo)準(zhǔn)體外心肺復(fù)蘇術(shù)(CPR)逆轉(zhuǎn)停搏心臟恢復(fù)自主循環(huán)(ROSC)，持續(xù)機(jī)械通氣一小時(shí)后停止機(jī)械通氣，達(dá)到拔管要求時(shí)拔出氣管導(dǎo)管。同時(shí)記錄兩組實(shí)驗(yàn)過程中基礎(chǔ)和

8、自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)后即刻、10分鐘、30分鐘、60分鐘時(shí)MABP、HR、P<,E>tCO<,2>、TR值，以及心跳停止時(shí)間(窒息到心跳停止(CA))、CPR時(shí)間(開始CPR到ROSC)、拔管時(shí)間(停止機(jī)械通氣到氣管導(dǎo)管拔除)、心肺復(fù)蘇成功和72小時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活例數(shù)。對(duì)組Ⅲ、Ⅳ的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于ROSC后2h、24h、48h、72h分別進(jìn)行ND評(píng)分，最后一次ND評(píng)分后稱體重。于72小時(shí)ND評(píng)分和稱重后，四組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉腦灌注固定制備腦組織

9、學(xué)損害檢測標(biāo)本，進(jìn)行海馬(CA1～3)區(qū)、皮層、丘腦、小腦和殼-尾核五腦區(qū)組織學(xué)損害(HD)評(píng)分，同時(shí)光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下觀察海馬(CA1～3)區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。海馬(CA1～3)區(qū)TNF-α，IL-1β免疫組染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)染色陽性和陰性細(xì)胞數(shù)。所得計(jì)量資料以x±s表示，計(jì)數(shù)資料已百分比表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較實(shí)驗(yàn)后前后各組及組間體重變化、實(shí)驗(yàn)前組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ基礎(chǔ)生理參數(shù)及ROSC后組Ⅲ和Ⅳ間相應(yīng)時(shí)間生理參數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。對(duì)組

10、Ⅰ和組Ⅱ?qū)嶒?yàn)前后和組Ⅲ、ⅣROSC后2h、2411、48h、72h的ND評(píng)分，組Ⅲ、Ⅳ的心跳停止時(shí)間、CPR時(shí)間以及氣管導(dǎo)管拔出時(shí)間，72小時(shí)后四組五腦區(qū)組織形態(tài)學(xué)損害差(HD)評(píng)分，各組海馬CA1～3區(qū)TNF-α，IL-1β免疫組化陽性染色細(xì)胞百分率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)果： 一、抗凝對(duì)沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉后腦復(fù)蘇影響實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組內(nèi)部及各組之間體重變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。夾

11、閉頸總動(dòng)脈后，與組Ⅲ相比，組Ⅳ出現(xiàn)昏迷的時(shí)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，出現(xiàn)呼吸困難的時(shí)間組延長(P<0.05)。動(dòng)脈開放后與組Ⅲ相比，組Ⅳ實(shí)驗(yàn)動(dòng)物意識(shí)恢復(fù)、翻正反射、恢復(fù)運(yùn)動(dòng)、覓食行為及運(yùn)動(dòng)平穩(wěn)時(shí)間明顯縮短，P<0.01；動(dòng)脈開放后20 min、60 min、24h、48h、72h ND評(píng)分明顯降低，P<0.01。與組Ⅲ相比，組Ⅳ實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物死亡率、72小時(shí)HD評(píng)分和TNF-α，IL-1β免疫組化陽性染色細(xì)胞百分率明顯降低，P<0

12、.01。實(shí)驗(yàn)前四組及72小時(shí)組Ⅰ、Ⅱ ND評(píng)分為0，P>0.05，無顯著性差異。組Ⅰ、Ⅱ海馬(CA1～3)、皮層、丘腦外側(cè)網(wǎng)狀核、殼-尾核和小腦HD評(píng)分為O，TNF-α，IL-1β免疫組化無陽性染色細(xì)胞，兩組間無顯著性差異，P>0.05。 正常對(duì)照組和假手術(shù)組海馬(CA1～3)區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞分布和形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，電子顯微鏡下細(xì)胞核膜染色質(zhì)及細(xì)胞器形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，TNF-α，IL-1β免疫組化無陽性染色細(xì)胞(P>0.0

13、5)。非抗凝組和抗凝組海馬(CA1～3)區(qū)在光學(xué)顯微鏡下神經(jīng)元細(xì)胞分布、形態(tài)結(jié)構(gòu)遭受不同程度損害，電子顯微鏡下細(xì)胞核膜、染色質(zhì)及細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)也程度不同破壞，非抗凝組損害程度明顯重于抗凝組。 二、抗凝對(duì)大鼠心跳驟停后CPCR影響實(shí)驗(yàn) SD大鼠窒息性呼吸驟停心肺腦復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)前后組Ⅰ、Ⅱ兩組及兩組之間體重變化無顯著性差異(P>0.05)，組Ⅲ和Ⅳ兩組內(nèi)體重變化有顯著性差異(P<0.05)，而組間無差異性(P>0.05)。

14、組Ⅲ、Ⅳ窒息8分鐘可造成至少4～5分鐘以上心跳停止。窒息前組Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ間MABP，HR，RT和P<,E>tCO<,2>基礎(chǔ)值無顯著性差異，P>0.05。與組Ⅲ相比，組ⅣROSC后即刻MAP明顯升高(P<0.01)，心跳停止時(shí)間明顯延長(P<0.01)、CPR時(shí)間明以及氣管導(dǎo)管拔除時(shí)間明顯縮短(P<0.01)，心肺復(fù)蘇成功率(P<0.05)、72小時(shí)存活率明顯升高(P<0.05)，ND和HD評(píng)分、TNF-α，IL-1β免疫組化陽性染色細(xì)胞

15、百分率明顯降低(P<0.01)。組Ⅰ、Ⅱ?qū)嶒?yàn)前后ND和HD評(píng)分無顯著性差異，P>0.05。與沙土鼠實(shí)驗(yàn)相似，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后正常對(duì)照組和假手術(shù)組海馬(CA1～3)區(qū)在光學(xué)顯微鏡下神經(jīng)元細(xì)胞分布和形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，電子顯微鏡下細(xì)胞核膜、染色質(zhì)及細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)正常，TNF-α，IL-1β免疫組化無陽性染色細(xì)胞。非抗凝組和抗凝組海馬(CA1～3)區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞分布和形態(tài)結(jié)構(gòu)遭受不同程度損害，電子顯微鏡下細(xì)胞核膜染色質(zhì)及細(xì)胞器形態(tài)結(jié)構(gòu)也程

16、度不同地受到破壞，非抗凝組損害程度明顯重于抗凝組。 研究結(jié)論： 肝素預(yù)抗凝預(yù)可明顯提高沙土鼠頸總動(dòng)脈夾閉10分鐘后全腦缺血腦復(fù)蘇轉(zhuǎn)歸，包括神經(jīng)系統(tǒng)功能和腦組織形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)三個(gè)方面。肝素預(yù)抗凝可以明顯提高SD大鼠窒息性心跳停止后心肺復(fù)蘇成功率和72小時(shí)存活率，并減輕72小時(shí)組織形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)損害，提高心肺復(fù)蘇后腦復(fù)蘇的轉(zhuǎn)歸。因此，肝素預(yù)抗凝可明顯改善和提高沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉10分鐘后腦復(fù)蘇和SD大鼠窒息性