微孔技術(shù)注入IGF-1對(duì)慶大霉素致聾豚鼠治療作用的研究.pdf

1、感音神經(jīng)性聾是耳鼻咽喉科常見病，據(jù)最新的第二次抽樣調(diào)查，全國(guó)約有2004萬(wàn)耳聾病人。發(fā)病原因公認(rèn)有缺血、病毒感染、耳毒性藥物中毒及老年性退行性變等。病理改變主要是毛細(xì)胞損傷、螺旋神經(jīng)節(jié)、支持細(xì)胞及神經(jīng)末梢的器質(zhì)性改變。相當(dāng)多治療效果不佳，并且至今沒(méi)有很好的方法。藥物治療無(wú)效的患者只有配戴助聽器或行人工耳蝸植入術(shù)。 近年來(lái)一些研究報(bào)道了哺乳動(dòng)物甚至人的內(nèi)耳前庭及耳蝸毛細(xì)胞在受傷后可能再生。臨床上可見到一些在慶大霉素治療后雙耳重度感

2、音神經(jīng)性聾患者，在停藥三周后聽力在低頻區(qū)提高15-20dB，3個(gè)月后所有頻率均有10-25dB的恢復(fù)。這些現(xiàn)象說(shuō)明人類前庭和耳蝸功能的恢復(fù)與鳥類內(nèi)耳毛細(xì)胞再生及功能恢復(fù)相一致的現(xiàn)象是可能存在的。同時(shí)，近幾年許多研究證明，體外培養(yǎng)的耳蝸Corti器用生長(zhǎng)因子類物質(zhì)可促進(jìn)內(nèi)耳受損的神經(jīng)和毛細(xì)胞修復(fù)再生。給耳聾治療帶來(lái)了極大的希望，但有關(guān)哺乳動(dòng)物的在體試驗(yàn)尚未取得成功。 胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growth fac

3、tor，IGF)是一類廣泛存在機(jī)體的多種器官和組織中的蛋白多肽，因其基因結(jié)構(gòu)和胰島素具有高度同源性，具有類似胰島素的作用而得名。尤其以胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(insulin-like growthfactor-1，IGF-1)在有促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、促進(jìn)組織修復(fù)、促進(jìn)物質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)代謝、降低血糖和促進(jìn)細(xì)胞分化分裂增殖等方面起著類似絲裂素及胰島素樣重要的生物學(xué)作用。IGF-1的生物學(xué)效應(yīng)可通過(guò)自分泌和旁分泌來(lái)實(shí)現(xiàn)，通過(guò)靶細(xì)胞表面的特異性受體介導(dǎo)

4、，是內(nèi)耳正常發(fā)育中不可缺少的調(diào)節(jié)因子，可以調(diào)節(jié)聽泡細(xì)胞的增殖、死亡和神經(jīng)元的發(fā)育和分化。所以推測(cè)，IGF-1可以作為一種較有前途的，能促進(jìn)內(nèi)耳毛細(xì)胞再生和促進(jìn)聽神經(jīng)修復(fù)，可以治療毛細(xì)胞和聽神經(jīng)受損所致聽力障礙的藥物。內(nèi)耳由于耳蝸的骨性結(jié)構(gòu)及具有血一腦和血一迷路雙重屏障的存在，使耳蝸成為一個(gè)相對(duì)封閉的微環(huán)境，可能使大多數(shù)蛋白類生長(zhǎng)因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥物難以有效充分的到達(dá)內(nèi)耳，故給許多內(nèi)耳疾病治療帶來(lái)了極大的困難。近年來(lái)，耳蝸鼓階開窗便成為基因

5、、細(xì)胞生長(zhǎng)因子等導(dǎo)入耳蝸的重要途徑。在開窗術(shù)的基礎(chǔ)上，將開窗孔徑控制在盡量不影響聽力的范圍內(nèi)而產(chǎn)生了微孔技術(shù)。Stover<'[11]>等研究認(rèn)為，經(jīng)鼓階鉆孔及通過(guò)圓窗膜途徑注射病毒載體對(duì)聽力沒(méi)有明顯影響。我科現(xiàn)在已成功完成了150多例電子耳蝸植入術(shù)，電子耳蝸植入術(shù)實(shí)際上即是鼓階開窗、微孔技術(shù)的應(yīng)用，并進(jìn)行電極的插入，對(duì)本項(xiàng)研究中有一定的借鑒作用。趙長(zhǎng)青曾用耳蝸微孔技術(shù)行豚鼠耳蝸灌注進(jìn)行誘發(fā)電位的研究，發(fā)現(xiàn)用耳蝸微孔技術(shù)進(jìn)行內(nèi)耳開窗，絕

6、大多數(shù)聽力損失在0-5dB，且1-2周內(nèi)可恢復(fù)正常。高鵬飛等認(rèn)為豚鼠鼓階開窗(直徑約為0.6mm)修復(fù)后對(duì)其聽閾和聽毛細(xì)胞無(wú)明顯影響。所以我們通過(guò)耳蝸微孔技術(shù)將IGF-1注入耳蝸進(jìn)行感音神經(jīng)性聾的治療，可以基本忽略手術(shù)本身對(duì)聽力的影響。 本實(shí)驗(yàn)為課題研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，擬用慶大霉素制造感音神經(jīng)性聾的動(dòng)物模型，然后通過(guò)在豚鼠耳蝸底回開窗，微孔注IGF-1入鼓階，來(lái)研究IGF-1對(duì)慶大霉素致耳聾豚鼠的治療作用，為臨床治療研究提供實(shí)驗(yàn)

7、依據(jù)。 目的 探討通過(guò)鼓階開窗，微孔技術(shù)注IGF-1入內(nèi)耳，研究IGF-1對(duì)感音神經(jīng)性聾動(dòng)物模型(慶大霉素致耳聾豚鼠)的治療作用。 方法 1．材料： 選取健康雜色黑目豚鼠50只(二級(jí)、南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重為250-300g，雌雄不拘，耳廓反射靈敏，鼓膜完整、標(biāo)志清楚，ABR．檢查排除聽力異常者。 2．實(shí)驗(yàn)步驟： 試驗(yàn)主要分四部分進(jìn)行： (1)將50只

8、豚鼠按照隨機(jī)化原則均分為兩組：設(shè)A組(正常對(duì)照組，25只)、B組(慶大霉素致耳聾模型組，25只)。A組正常條件下飼養(yǎng)，B組肌注慶大霉素(GM)連續(xù)28天，用聽性腦干誘發(fā)電位監(jiān)測(cè)造模效果。 (2)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，研究清醒狀態(tài)能否取代麻醉狀態(tài)來(lái)進(jìn)行豚鼠ABR．測(cè)試，以降低豚鼠(尤其是慶大霉素致耳聾豚鼠)的意外死亡率，保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。 (3)造模完成后，將A組選20只隨機(jī)均分為Ⅰ組(正常組，10只)，Ⅱ組(手術(shù)組，10只)

9、；將Ⅰ組正常飼養(yǎng)，Ⅱ組行內(nèi)耳鼓階開窗，微孔注入術(shù)。了解手術(shù)對(duì)豚鼠聽力及耳蝸組織結(jié)構(gòu)的影響。 (4)B組選20只隨機(jī)均分Ⅲ組(GM組，10只)，Ⅳ組(IGF-1組，10只)。Ⅲ、Ⅳ組行內(nèi)耳鼓階開窗，Ⅲ組在鼓階內(nèi)注入人工外淋巴液、Ⅳ組微孔注入IGF-1。研究IGF-1對(duì)GM致聾豚鼠的治療作用。 每部分實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(所有數(shù)據(jù)均由測(cè)聽系統(tǒng)電腦記錄，采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用相應(yīng)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析)和形態(tài)

10、學(xué)觀察(利用光鏡，掃描電鏡，透射電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察研究)。 結(jié)果 1．B組注射慶大霉素28天后與A組反應(yīng)閾有顯著差異(P<0.01)。 2．A組在清醒和麻醉狀態(tài)下反應(yīng)閾，Ⅰ、Ⅲ波間期無(wú)顯著差異(P>0.05)3．Ⅰ組和Ⅱ組反應(yīng)閾在術(shù)后7天無(wú)顯著差異(P>0.05)。Ⅱ組反應(yīng)閾在術(shù)前1小時(shí)和術(shù)后7天無(wú)顯著差異(P>0.05)。4．Ⅲ組和Ⅳ組反應(yīng)閾在術(shù)后14天有顯著差異(P<0.01)。Ⅳ組反應(yīng)閾在術(shù)前與術(shù)后14天比

11、有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論 1、慶大霉素具有耳毒性，但腎毒性較其他氨基糖甙類抗生素小，價(jià)格便宜，臨床應(yīng)用廣泛，較易獲得，是制造感音神經(jīng)性聾動(dòng)物模型的理想藥物。 2、ABR測(cè)試具有波形穩(wěn)定易辯，記錄方便，從其波形的反應(yīng)閾、各波潛伏期、波間期、振幅等可以分析聽覺(jué)腦干通路及其附近結(jié)構(gòu)的生理病理情況，是客觀評(píng)價(jià)豚鼠聽力變化的理想指標(biāo)。 3、由郭夢(mèng)和教授研制的“聽覺(jué)電生理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)”測(cè)聽系統(tǒng)準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便